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第三节 吸光光度法 一、测定原理 基于物质对光的选择性吸收而建立的分析方法称为吸光光度法，包括比色法、 有些物质的溶液是有色的，例如溶液呈紫红色，水溶与生成血红色配合物； 与邻二氮菲生成 吸光光度法主要用于测定试样中的微量组分，具有以下特点： (1)灵敏度高。常可不经富集用于测定质量分数为～。的微量组～的痕量组分。通常所测试的浓度～。 (2)准确度高。一般目视比色法的相对误差为5％～l0％，分光光度法为 2％～5％。 (3)应用广泛。几乎所有的无机离子和许多有机化合物都 理生化及土壤、植株等的测定。 (4)仪器简单，操作方便，快速。近年来，由于新的、灵敏度高、选择性 （一）物质对光的选择性吸收 1光的基本性质 光是一种电磁波，同时具有波动性和微粒性。光的传播，如光的折射、衍、频率，它们与光速的关系是： (10．1) 在真空介质中光速为2，还有一些现象，E决定于光的频率。 (10．2) 式中E为光子的能量(J)；h为普朗克常数(6)。 由式(10．2)可知，A越小，E 我们将眼睛能够感觉到的那一小段的光称为可见光，它只是电磁波中的一(400～750 nm)，也就是我们日常所见的日光、白炽光，是由(即由不同波长)。理论上，将仅具有某一波 2．光吸收曲线 颜色是物质对不同波长光的吸收特性表现在人视觉上所产生的反映。一种(离子或分子)对不同波长的光具溶液选择吸收了白光中的绿色光，与绿色光互溶液呈现紫色。 当依次将各种波长的单色光通过某(吸光度A)， （3）吸收光谱产生的原理 吸收光谱一般有原子吸收光谱和分子吸收光谱。原子吸收光谱是由原子外E。原子的核能E小分子转动能E，和分子平动能E。E。和基团间的内旋转能E。等。当不考虑各种运动之间的相互 由于在一般化学实验条件下，不发生变化，和又比较小，所以 而这三种能量又都是量子化的，对应有一定的能级。 在同一电子能级内，分子的能量还因振动能量的不同而分成若干分级，称为振动能级。当分子处于某一电子能级中某一振动能级时，分子的能量还会因转动能量的不同再分为若干分级，称为转动能级。显然，电子能级的能量差，振动能级的能量差和转动能级的能量差，间相 当分子状态一定时，分子的总能量就是分子所处的电子能级、振动能级和 分子的转动能级能量差一般在0．005～0．05 eV，产生此能级的跃迁，需250～25的远红外光，这种光谱称为转动光谱或远红外光谱。 分子的振动能级能量差一般在0．05～1 eV，需吸收波长约为25～1．25 分子的电子能级能量差约1～20 eV，比分子振动能级差要大几十倍，1．25～0．06，主要在真空紫外到可见光区，相应形 （二）光的吸收的基本定律 1朗伯一比耳定律 1760年，朗伯(Lamber)指出，当单色光通过浓度一定的、均匀的吸收b成正比。这种关系称为朗伯定 1852年，比耳(Beer)指出，当单色光通过液层厚度一定的、均匀的吸收成正比。这种关系 如果同时考虑溶液浓度与液层厚度对光吸收程度的影响，即将朗伯定律与 该式称为朗伯一比耳定律的数学表达式。上述各式中、分别为人射光为光通过的液层厚度(cm)；c为吸光物质的浓度()，和K均为比例常数，与吸光物质的性质、入射光波长及等与吸光物质的浓度和光通过的液层厚度的 由于式中的等项表明了溶液对光的吸收程度，定义为吸光度，A表示；同时，是透射光强度与入射光强度之比，表示了入射(以％表示时为透光率)，以T表示，所以又可表示为 应用该定律时应注意：(1)朗伯一比耳定律不仅适用于有色溶液，也可适(包括液体、气体和固体)；(2)该定律应用(3)吸光度具有加和性，是指溶液的总吸光度等于各吸光物质的 2．吸光系数和摩尔吸光系数 式中的比例K值随c、b所用单位不同而不同，如果液层厚的单位为cm，浓度c的单位为，K用以表示，n称为吸光系数，，则(10．6)式写为： A=abc (10．7) 如果液层厚度b的单位仍为cm，但浓度c的单位为，则常数K用表示，称为摩尔吸光系数，其单位是，此时(10．6)写为： A=bc 吸光系数a和摩尔吸光系数是吸光物质在一定条件、一定波长和溶剂情值，同一化合物在不同波长处的也可能不同，在最大吸收波长处的一表示。值越大，表示该有色物质对入射光的吸收能力值的大小，比较它们对测定该组分的灵敏度。以前曾认为1×的反应即为灵敏反应，随着近代高灵敏显色反应体系的不断≥6×的显色反应才属灵敏反应，2×已属于不灵敏的显色反应。目前已有许多≥1×的高灵敏显色反应可供选择。 应该指出的是，值仅在数值上等于浓度为1 ，1 cm时有色溶液的吸光度，在分析实践中不可能直接取浓度为1 的有色溶值，而是根据低浓度时的吸光度，通过计算求得。 还应指出的是，上例求得的值是把待测组分看做完全转