周灿华SeminarI量子点荧光探针的研究进展要点分析.pptVIP

* * 量子点荧光探针的研究进展 报告人：周灿华 导 师：何国钟 院 士 韩克利 研究员 主要内容： 背景介绍 研究进展 1、肝癌细胞荧光成像 2、蟾蜍胚胎细胞成像 3、荧光编码技术 4、环境离子检测 前景展望 量子点(Quantum dots, QDs)，即半导体纳米微晶，是一种优越的纳米荧光材料。虽然在上世纪50年代就己出现，但直到1998年，Alivisatos和Nie的两个研究小组分别解决了其水溶性和生物相容性的问题之后，才将其引入生物学领域以来，此后QDs在生物、医学、材料等领域中的应用研究受到了极大的关注。 量子点(QDs)，是由ⅡB/ⅥA (如CdSe等)或ⅢA/ⅤA(如InP、GaAs等)族元素组成的稳定的、溶于水的、尺寸在1~100 nm之间的纳米晶粒。量子点半径小，电子和空穴被量子限域，连续能带变为分立能级，受激发后形成电子-空穴对，当电子和空穴再次结合时发出荧光。其特殊的物理结构及尺寸使其具有不同于一般有机荧光探针的光学特性。 背景介绍 (1)激发波长范围宽而发射波长范围窄，即可被小于发射波 长10nm的任意波长的激发光激发。荧光染料的激发波长范围较窄,发射波长宽且托尾，特定的荧光染料需要特定波长的激发光来激发。 光学特性 激光生物学报, 2006, 15(2): 214-220 (2)发射峰窄且对称，重叠小，半高峰宽通常只有40nm甚至更小。这样就可以使用同一种激发光同时激发多种量子点而获得多色荧光，而发射光谱不出现交叠，使生物分子的多组分检测成为可能。 Analytical Chemistry, 2004, 76(3): 684-688 (3)量子点的发射波长可在400-1400 nm之间通过控制其大小和组成来调谐,大小均匀的量子点谱峰为对称高斯分布,其荧光量子产率在室温下约为50%。CdSe量子点为例:当CdSe量子点的直径为2nm时，能发射出550nm的绿色光；当直径增大到4nm时，则变成了630nm的红色光。 Science, 2005, 307: 538-544 (4)量子点的荧光量子产率高，强度强，稳定性好，抗漂白能力强。比常用的染料分子要亮10-20倍和稳定100倍以上。可以经受多次激发,且标记后对生物大分子的生理活性很少影响, 可以对所标记的物体进行长时间的观察：如罗丹明6G的荧光寿命在纳秒级（～3.7ns），量子点荧光探针最大能达ms级。 Chin. J. Exp. Surg, 2006, 23(9): 1085-1087 1、量子点对肝癌细胞的免疫荧光成像 QDs技术在生物医学领域的应用，尤其是作为一种新型肿瘤成像技术研究，前景十分广阔。陈良冬等将QDS合成及标记技术引人肝癌研究，通过对肝癌肿瘤标志物一甲胎蛋白(AFP)的特异性识别，寻求一种较现有有机荧光技术更理想的荧光成像技术。 人肝癌细胞的特异性标记成像：通过共聚焦激光荧光显微镜，可以清楚观察到，肝癌细胞株HC-CLM6中表达AFP的细胞浆被QDs-IgG复合物探针特异性识别，并表现出较FITC绿色荧光更为明亮的橘红色荧光。 研究应用 Chin. J. Exp. Surg, 2006, 23(9): 1085-1087 QDs-IgG复合物探针的光稳定性： 将分别用QDs-IgG复合物探针和传统的FITC-IgG标记的肝癌细胞进行连续激发实验，比较两者的光稳定性：QDs橘红色荧光在高强度共聚焦激光连续激发lh情况下无明显衰减，而FITC绿色荧光从激发开始即出现明显衰减趋势，在lh内基本碎灭。 t/6min QDs-IgG复合物探针对裸鼠肝癌模型肿瘤组织石蜡切片的免疫荧光成像：肝癌组织石蜡切片中表达AFP的肝癌细胞浆被QDs－IgG复合物探针特异性识别，表现出明亮的橘红色荧光。 由于量子点极强的荧光稳定性，使其在活体方面的研究成为可能。 Dubertret B等将磷脂胶囊包覆单个量子点，然后注入非洲蟾蜍胚胎中，结果发现量子点微团能够稳定而安全的存在于胚胎中，量子点的荧光可以随着蝌蚪的生长一直存在。所以，可以用量子点来观察蟾蜍胚胎细胞发育过程。研究还表明：适当修饰的QDs在短时间内,对细胞的生长、发育、信号转导以及迁移等生理活动无影响。 2、体内成像 Science, 2002, 298: 1759-1762 3、量子点荧光编码技术 量子点派生技术，一个令人兴奋的进展是近年出现的发光编码微球。Han et al.将量子点包埋于可调的发光微球。这种发光微球具有如下特点: (l)强度可调。通过控制原料比，可以调节包埋于微球中的纳米晶体的数量，从而使不同