第九讲黄酮类分析.docVIP

第九讲 黄酮类分析 基本结构 2－苯基色原酮（见课本） ● 黄酮类化合物苷元的主要结构类型（见课本） 常见富含黄酮药材 黄芩－黄芩苷；葛根－葛根素；淫羊藿－淫羊藿苷；银杏叶－山奈素；槐米－芦丁 结构与性质 ● 多为结晶 ● 其是否呈色与分子结构有关 –如双氢黄酮，由于2，3位饱和，不存在交叉共扼体系，多为无色。 –异黄酮类共轭系统减小，仅显微黄色。 –花色素所显颜色与pH值有关，pH值小于7显红色，等于8.5则显紫色，大于8.5为蓝色。 黄酮类化合物在紫外光下有无荧光及荧光颜色与分子结构有关。 ● 溶解性 游离黄酮类化合物一般难溶或不溶于水，可溶于甲醇、乙醇、乙酸乙酯、乙醚等有机溶剂，具酚羟基的可溶于稀碱水。黄酮甙类一般易溶于热水、甲醇、乙醇、吡啶及稀碱水，极性小的黄酮甙也可部分溶于乙酸乙酯中。 ● 酸碱性 黄酮类化合物若具有酚经基则显酸性，其酸性强弱与酚羧基的位置及数目多少有关。 鉴别方法 (一)还原反应 –盐酸—镁粉反应 ● 是检查中药中是否有黄酮类化合物的最常用方法之一。在样品的乙醇或甲醉溶掖中加人少量镁粉振摇，再滴入几滴浓盐酸，1~2分钟(必要时水浴上加热)即显出颜色。 –钠汞齐还原反应 ● 向黄酮类化古物的乙醇溶液中加入钠汞齐，放置数分钟至数小时或加热，过滤，滤液用盐酸酸化，则黄酮、二氢黄酮、异黄酮、二氢异黄酮类显红色，黄酮醇类显黄~淡红色，二氢黄酮醇类显棕黄色。 –四氢硼钠还原反应 ● 二氢黄酮、二氢黄酮醇类可被四氢硼钠还原生成红~紫红色的物质。 (二)与金属盐类试剂的络合反应 ● 黄酮类化合物中若具有3—羟基、4—羰基或5—羟基、4—羰基或邻二酚羟基，则可以与许多金属盐类试剂如铝盐、铁盐、锆盐、镁盐、铅盐等反应，生成有色的络合物。 (三)与碱反应 ● 黄酮类在冷和热的氢氧化钠水溶液中能产生黄~棕红色 ● 查耳酮类在碱液中能很快产生红或紫红色 ● 二氢黄酮类在冷碱中呈黄~橙色，放置一些时间或加热则呈深红到紫红，此系开环后变 成查耳酮类之故 ● 黄酮醇类在碱液中先呈黄色，当溶液中通入空气后，因3—位羟基易氧化，溶液即转变为棕色。三个羟基相邻的黄酮类化合物 色谱鉴别 黄酮类化合物的色谱鉴定主要有硅胶薄层色谱法、聚酰胺薄层色谱法和纸色谱法。 (一)硅胶薄层色谱法 –可用于游离黄酮和黄酮甙类的鉴定，这是一种吸附层折，化合物Rf值大小与化合物极性大小有关，Rf值小，化合物极性大，Rf值大，化合物的极性小。 –硅胶薄层层析法展开剂，游离黄酮常用有机溶剂系统，如甲苯—氯仿—丙酮(40:25:35) 黄酮甙类常用含水或酸水有机溶剂，如乙酸乙酯—丁酮—甲酸—水(5:313:1)。 (二)聚酰胺薄层色谱法 ● 可用于分离游离黄酮和黄酮苷类 ● 分离游离黄酮 常用的展开剂多为有机溶剂(如苯—丁酮—甲醇，6:2:2)。此时聚酰胺主要表现为吸附层析。Rf值大小排列次序同硅胶层析法； ● 分离黄酮甙类 常用含水的有机溶剂为展开剂。此时聚酰胶主要表现为氢键的吸附作用，化合物被吸附的强弱与结构中酚羟基的多少、共轭系统的大小及酚羟基是否形成分子内氢键等因素有关。 (三)纸色谱法 为分配层析。可用于游离黄酮和黄酮苷类的鉴定。展开剂常用两类： ● 一类为酸性展开剂，此时极性小的化合物要比极性大的化合物在展开剂中分配多，因此Rf值亦较大 ● 另一类展开剂为水性展开剂，常用2％一6％乙酸，乙酸—浓盐酸—水(30:3:10)等。此时极性小的化合物要比极性大的化合物在展开剂中分配少，而极性大的化合物要比极性小的化合物在展开剂中分配多，因此Rf值极性大的比极性小的要大。 紫外光谱鉴别 两个主要吸收带组成，出现在300一400nm之间的吸收带称带I，出现在240一280nm之间的吸收带称带II。 (1)甲醇钠：甲醇钠碱性较强，可使黄酮类化合物母核上所有酚羟基解离。吸收带向红位移。 (2)乙酸钠：乙酸钠的碱性比甲醇钠小，只能使黄酮类化合物母核上酸性较强的醇羟基解离， 导致相应的吸收带向红位移。 (3)乙酸钠／硼酸：黄酮或黄酮醇类化合物A环或B环上如果具有邻二酚羟基时(5，6位邻二酚经基除外)，在NaAc碱性下可使相应吸收带向红位移。 (4)三氯化铝及三氯化铝／盐酸：可与具有3—羟基、4—羰基或5—羟基、4—羰基的黄酮或黄酮醇类化合物作用生成络合物，使带I或带II红移。 异黄酮、二氢黄酮和二氢黄酮醇类在甲醇中的UV光谱特征 ● 在这三类化合物中都有苯甲酰系统，都具有强的带II吸收，而异黄酮无桂皮酰系统，所以它的紫外光谱带I以肩蜂或低强度吸收峰出现，很容易与黄酮及黄酮醇区别。 查耳酮类在甲醇中的UV光谱特征 ● 查耳酮的紫外光谱特征是带I的吸收强，为主峰，而带II吸收弱。 含量测定 ● 紫外分光光度法 –以