紫皮大蒜和白皮大蒜中大蒜素含量的对比08科三马杏贤许爱娟叶晓阳.docVIP

紫皮大蒜和白皮大蒜中大蒜素含量的对比 华南师范大学 生命科学学院 生物科学 马杏贤爱娟晓阳 要 本实验先使用同一种有机溶剂——95%乙醇（分析纯）分别提取紫皮大蒜皮和蒜肉及白皮大蒜皮和蒜肉中的大蒜素，再利用1.0 mmol/L 半胱氨酸溶液和1.0 mmol/L DTNB 溶液1 mL反应产生黄色物质NTB，通过可见光分光光度计在412 nm 波长下测量NTB的吸光值来计算大蒜素含量。从多组平行和对照实验组中对比分析大蒜素含量，为大蒜素提取工艺更好地选材提供依据。 关键词：紫皮大蒜 白皮大蒜 大蒜素 大蒜素含量 1 前言 大蒜是百合科一年生蔬菜，具有特殊的香辛气味,能促进消化、增进食欲以及具有显著的保健作用和巨大的药用价值。, 其中大蒜素是大蒜的主要活性成分, 是一种硫化丙烯类物质。 具多种生物活性，被誉为天然广谱抗生素，有抗真菌、抗细菌、降血酯、降血压、防治动脉粥样硬化等心血管疾病的作用，并具有良好的抗癌，防癌的作用。(C6H10S2O)和两分子半胱氨酸(C3H7NO2S)反应生成两分子S- AMC(C3H5- S- S- CH2CH-(NH)2COOH)。将过量的半胱氨酸与大蒜素反应, 用DTNB(5,5 - 二硫代双(2- 硝基苯甲酸))法测定反应前后半胱氨酸量,也就是一分子半胱氨酸与一分子DTNB(5,5- 二硫代双(2- 硝基苯甲酸))反应生成黄色物质NTB(2- 硝基- 5- 硫代苯甲酸), NTB 在412 nm 处有最大吸收, 摩尔消光系数为14150(光径1 cm), 用分光光度法测得半胱氨酸含量。然后根据半胱氨酸减少量计算出大蒜素含量。 4 实验设备 一台组织捣碎机，一台恒温水浴箱，一台离心机，一台可见光分光光度计，减压蒸馏装置一套（或用普通蒸馏装置和真空抽气泵），比色杯一套，试剂瓶4个，18个500ml锥形瓶，6个500ml烧杯,7支10ml移液管，3支1ml移液管，4支胶头滴管，6只药勺，标签纸，20支10ml试管，1个洗液瓶，2个棕色瓶 5 实验材料及试剂 a 试剂的配置 蒸馏水，95%的乙醇，50mmol/L pH7.5 的Tris - HCl 缓冲溶液（由Tris - Base(Sigma)加HCl 配制）, 1.0 mmol/L DTNB（5,5 - 二硫代双(2- 硝基苯甲酸 )溶液由DTNB(Sigma)加50 mmol/L pH7.5 的Tris - HCl 缓冲溶液配制, 存于棕色瓶中）; 1.0 mmol/L L- 半胱氨酸溶液（由L- 半胱氨酸(Sigma)加50 mmol/L pH7.5 的Tris- HCl 缓冲溶液配制, 现用现配）。 b 材料的处理 新鲜的紫皮大蒜和白皮大蒜（市售） 6 实验操作步骤 6.1 大蒜素的提取 6.1.1 准备足够量的紫皮大蒜和白皮大蒜，去掉最外面脏、老的部分皮后，用蒸馏水清洗干净至无明显污渍。然后分别剥取出紫皮大蒜的皮、白皮大蒜的皮、紫皮大蒜的蒜肉、白皮大蒜的蒜肉，放置好备用。 6.1.2 分别取180g 紫皮大蒜的皮、白皮大蒜的皮、紫皮大蒜的蒜肉、白皮大蒜的蒜肉置于组织捣碎机捣成蒜泥，得到4份捣碎液。 6.1.3分别取18锥形瓶，编号a1、a2、a3、b1、b2、b3、c1、c2、c3、d1、d2、d3、e1、e2、e3、f1、f2、f3。分别将40g紫皮大蒜的皮加入到a1、a2、a3中，将三份等量40g白皮大蒜的皮加入到b1、b2、b3中，将三份等量40g紫皮大蒜的蒜肉加入到c1、c2、c3中，将三份等量40g白皮大蒜的蒜肉加入到d1、d2、d3中，将三份20g紫皮大蒜和20g紫皮大蒜蒜肉加入到e1、e2、e3中，将三份20g白皮大蒜和20g白皮蒜肉加入到f1、f2、f3中。 6.1.4将上述处理好的锥形瓶放到40℃恒温水浴箱中保温0.5小时，让其充分酶解。 6.1.5取出上述保温后的锥形瓶，分别加入160mL95%乙醇（分析纯），轻微震荡，使其溶解，在常温下静置1小时。 6.1.6向上述加入乙醇后的混合物分别离心机中离心，得到各上清液。 （注：若有符合条件的蒸馏装置则进行第6.1.7步，若没有符合条件的装置也可直接进行下一步大蒜素含量的测定。） 6.1.7每份上清液取等量10ml，将其置于减压蒸馏装置中，控制温度在50℃，旋转蒸发仪转速在75r/s进行减压浓缩。 6.2大蒜素含量的测定 6.2.1取50ml 0.1mol/L三羟甲基氨基甲烷（Tris）溶液与0.1mol/L盐酸混匀并稀释至10050mmol/L pH7.5 的Tris- HCl 缓冲溶液，保存在棕色瓶中备用。 6.2.2 取0