2013分子生药学实验资料.docVIP

分子生药学实验 （讲义） 华中科技大学同济药学院中药系 2013.9 目录 实验一 植物组织培养实验 实验二 麦冬遗传多样性分析 实验三 蛇类DNA条形码研究 实验四 发根和根癌农杆菌介导的植物基因转化技术 实验五 黄酮类化合物柚皮素葡萄糖醛酸苷的仿生合成 实验一 植物组织培养实验 目录 一、 实验时间 2 二、 实验目的 2 三、 实验背景及原理 2 四、 实验材料 2 仪器设备： 3 材料及试剂 3 五、 实验方法 3 1、MS培养基配制 3 1·1、MS大量元素母液的配制 3 1·2、MS微量元素母液配制 4 1·3、铁盐母液的配制 4 1·4、MS有机母液的配制 4 1·5激素的配制 4 1·6、配制MS培养基 4 2、无菌操作 5 3、建立体系 5 3·1、获得外植体 5 3·2、消毒 5 3·3、转入 5 4、快速繁殖 6 5、剥取茎尖 6 五、实验结果 6 六、结果分析 8 七、讨论 8 实验时间 2013年 月 日开始培养 实验目的 掌握植物组织培养概念，认识植物组织培养依据、特点和类型，了解植物组织培养在现代经济发展中的应用。 具备植物组织培养基本认知能力，具备植物组织培养的基本技能。 实验背景及原理 植物组织培养是指通过无菌操作，把植物的外植体接种于人工配置的培养基上，在人工控制的环境里进行培养，使其成为完整植株的方法。 20世纪初，细胞全能性设想的提出是植物组织培养的萌芽。1902年Haberlandt发表了植物组织培养第一篇论文，预言：“植物的体细胞在一定条件下，可以如同受精卵一样，具有潜在发育成植株的能力。1922年Haberlandt的学生W．Kotte和美国的Robbins采用无机盐、葡萄糖和各种氨基酸培养豌豆和玉米的茎尖，结果形成缺绿的叶和根，能进行有限的生长。1934年美国植物生理学家White培养番茄的根，他在包含无机盐和蔗糖的培养基中加入了酵母浸出液，结果建立了第一个活跃生长的无性繁殖系，并能进行继代培养。1941年Overbeek等首次把椰子汁(CM)加入培养基中，使曼陀罗的心形期幼胚离体培养至成熟。20世纪60年代以后，植物组织培养进入了迅速发展阶段，研究工作更加深入与广泛。1960年Cocking等人用酶分离原生质体获得成功，开创了植物原生质体培养和体细胞杂交工作。 植物组织培养基本原理:植物细胞具有全能性，即生物体的细胞具有使后代细胞形成完整个体的潜能。离体的植物组织或细胞（也称外植体），在培养了一段时间以后会通过细胞分裂形成愈伤组织（愈伤组织的细胞排列疏松而无规则，是一种高度液泡化呈无定形状态的薄壁细胞）。由高度分化的植物组织或细胞产生愈伤组织的过程，称为植物组织的脱分化，或者叫作去分化。脱分化产生的愈伤组织继续进行培养，又可以重新分化成根或芽等器官，这个过程叫作再分化。再分化产生的试管苗，移栽到大田，可以发育成完整的植物体。 植物组织培养的应用: 1.快速繁殖优良种苗，具有周期短、增殖率高、不受季节限制的特点，在短时间内快速培养出大量的植物，而且使不能或很难繁殖的植物进行繁殖。 2.无病毒苗的培养，采用茎尖培养的方法，得到无病毒植株，该方法已在很多作物的常规生产上得到应用，如马铃薯、甘薯、草莓、苹果、菊花等。 3.在育种上的应用，植物组织培养技术还为育种提供了许多新的手段和方法，如用花药培养单倍体植株；用原生质体进行体细胞杂交和基因转移；用子房、胚和胚珠完成胚的试管发育和试管受精等；种质资源的保存等。 4.工厂化育苗，具有繁殖速度快、整齐、生长周期短、遗传性稳定等特点，特别是对一些需要保持其优良遗传性的植株，有更重要的作用。 5.生产细胞产物，这些细胞产物包括蛋白质、脂肪、糖类、药物、香料、生物碱等等。目前三七、紫草和银杏的细胞产物都已经实现了工厂化生产。 植物组织培养的新技术展望： 1.植物无糖组织培养技术，该技术用二氧化碳气体代替培养基中的糖作为组培苗生长的碳源，采取人工环境控制的手段，提供适宜不同种类组培苗生长的条件，充分发挥植株自身的光合能力，使之由异养型转变为自养型，从而达到快速繁殖优质种苗的目的。 2.植物开放式组培技术，植物开放式组培是在使用抗菌剂的条件下，利用塑料杯代替组培瓶，在自然开放的有菌环境中进行的植物组培。 3.新型光源的应用，目前的新型光源有LED、CCFL、SILHOS等。 4.组培容器的改进，改进容器形态，扩大体积，增加单位培养面积中组培苗的数量；同时，改良容器和封口材料，以达到优质、通气、隔菌、方便、耐久的目的。 5.多因子综合控制技术，多因子综合控制技术，是指利用大型组培设施，对组培苗生长过程中的CO：浓度、光照、温度、湿度等环境因子进行综合控制的技术。 实验仪器和材料 仪器设备： 电炉、pH计、铝锅、玻璃