任务二维生素C注射液的含量测定教案解析.ppt

思考题 1．高效液相色谱法有哪些特点？高效液相色谱仪主要由哪几大系统组成？ 高效液相色谱法特点是速度快、分辨率高、灵敏度高、色谱柱可反复使用、样品量少。高效液相色谱仪的系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。 2．在高效液相色谱中，为什么要对流动相脱气？ （1）脱气是为了防止流动相从高压柱内流出时，释放出气泡。这些气泡进入检测器后会使噪声剧增，甚至不能正常检测。 （2）溶解氧会与某些流动相与固定相作用，破坏它们的正常功能。对水及极性溶剂的脱气尤为重要，因为氧在其中的溶解度较大。 * 机体的大部分免疫功能都依赖于IgG 维生素C的含量测定 组别：2组 组员：王鹏飞 李东 于天齐 苏剑 为什么要维生素C测定的含量？ 精密量取本品适量，用水稀释制成每1ml中约含20μg的溶液，照肌苷项下的方法测定，计算，即得。 色谱分析法—高效液相色谱法、气相色谱法 举例—维生素C 注射液 怎么测定的含量？ 一、背景知识 高效液相色谱概述 基本原理 液相色谱仪 二、 HPLC仪器 高压输液泵 梯度淋洗装置 进样装置 高效分离柱 高效液相色谱检测器 三、实验仪器、设备与药品 液相色谱仪测定的检测流程 数据采集与分析 测定维生素C的含量—高效液相色谱法 背景知识 概念 色谱法:利用组分在两相间分配系数不同而进行分离的技术。 高效液相色谱法（high performance liquid chromatography，缩写 HPLC），又译高效液相层析法，以前曾指高压液相层析法（high pressure liquid chromatography），用来分离液体混合物，以确认并量化各个成分的比例。 高效液相色谱仪 检测的分辨率和灵敏度高，分析速度快，重复性好，定量精度高，应用范围广。 适用于分析高沸点、大分子、强极性、热稳定性差的化合物。 价格昂贵，要用各种填料柱，容量小，分析生物大分子和无机离子困难，流动相消耗大且有毒性的居多。 背景知识 特点： 色谱原理 HPLC是利用样品中的溶质在固定相和流动相之间分配系数的不同，进行连续的无数次的交换和分配而达到分离的过程。 固定相材料 微粒硅胶：pH范围是 2～7.5，若过碱（＞pH8），硅胶会粉碎或溶解；若过酸（＜pH1），键合相的化学键会断裂。 优点： ①硅胶的强度大；②微粒硅胶的小孔结构和表面积易人为控制；③化学稳定性好。 基本原理 ①样品易溶，且溶解度尽可能大。 ②化学性质稳定，不损坏柱子。 ③不妨碍检测器检测，紫外波长处无吸收。 ④粘度低，流动性好。 ⑤易于从其中回收样品。 ⑥无毒或低毒，易于操作。 ⑦易于制成高纯度，即色谱纯。 ⑧废液易处理，不污染环境。 流 动 相 选 择 原 则 基本原理—流动相 HPLC仪器: 液相色谱仪 (1) 高压输液泵 主要部件之一，压力：150～350×105 Pa。 为了获得高柱效而使用粒度很小的固定相（10μm），液体的流动相高速通过时，将产生很高的压力，因此高压、高速是高效液相色谱的特点之一。 应具有压力平稳、脉冲小、流量稳定可调、耐腐蚀等特性 (2) 梯度淋洗装置 外梯度: 利用两台高压输液泵，将两种不同极性的溶剂按一定的比例送入梯度混合室，混合后进入色谱柱。 内梯度: 一台高压泵, 通过比例调节阀,将两种或多种不同极性的溶剂按一定的比例抽入高压泵中混合。 液相色谱仪 (3) 进样装置 流路中为高压力工作状态， 使用耐高压的六通阀进样装置 液相色谱仪 FLASH动画 (4)高效分离柱 柱体为直型不锈钢管，内径1～6 mm，柱长5～40 cm。发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。 液相色谱仪 (5) 高效液相色谱检测器 紫外光度检测器（UV）：最小检测量10-9g·mL-1，对流量和温度的波动不敏感，可用于梯度洗脱。 FLASH动画 实验仪器、设备与药品 仪器 Agilent 1100 液相色谱仪一套 试剂 乙腈 水 样品 色谱工作站界面 液相色谱仪测定的检测流程 仪器自检 打开工作站电源 进样 记录 计算 冲洗色谱柱 结束进样 关闭主机电源 关闭 电脑 开电脑 设定参数 调参数 数据采集与分析 * 机体的大部分免疫功能都依赖于IgG