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果蔬（甜瓜、马铃薯） 采后生理生化 实 验 方 法 甘肃农业大学 食品科学与工程学院 采后生物学与技术实验室目 录  一 活性氧代谢相关酶活性及代谢产物含量测定 1. O2.-产生速率的测定 参照王爱国罗广华方法。.0 g果肉组织，加入 mL 100 mmol/L磷酸缓冲液（pH 7.8，含0.% PVPP（W/V））在冰浴条件下研磨匀浆于412,000×g离心 min。取1mL上清液，加入1ml磷酸缓冲液（pH 7.8）和 mL 1 mmol/L的盐酸羟胺溶液，在25。加入1 mL17 m对氨基苯磺酸和1 mL α-萘胺，于25保温0 min进行显色反应，测定显色液在530 nm处测定吸光度值以nmol· min-1·-1表示。 王爱国罗广华植物的超氧物自由基与羟胺反应的定量关系.植物生理学通讯1990, 6: 55-57. 2. H202含量的测定 参照Prochazkova et al.（2001）的方法。.0 g果肉组织，加入 mL冷丙酮冰浴磨匀浆4℃下12,000×g离心 min。取 mL上清液，加入0μL 20%的四氯化钛溶液（溶于浓盐酸，V/V）和0 μL浓氨水，混匀反应5 min后离心1 min。沉淀部分用冷丙酮洗涤次以减少色素的干扰，最后将沉淀溶于 mL 1mmol/L H2SO4溶液中，于410 nm测定溶液的吸光度值。按同法作H2O2H2O2含量以nmol· min-1-1 表示。 Prochazkova D, Sairam R K, Srivastava G C, et al. Oxidative stress and antioxidant activity as the basis of senescence in maize leaves. Plant Sci. 2001161: 765-771. 3. 细胞膜完整的测定 参照Lester and Bruton（1986）的方法并修改。min后测定最终的电导率。细胞膜完整率由下式计算： 细胞膜完整率（%）=[1-（3 h后电导率/最终电导率）]×100% Lester G E, Bruton B D. Relationship of netted muskmelon fruit water loss to postharvest storage life. J. Amer. Soc. Hort. Sci. 1986, 111,727-731. 4. 丙二醛（MDA）含量测定 参照Hodges et al.（1999）的方法并修改。.0 g果肉组织，加入 mL 100g/L三氯乙酸（TCA）溶液研磨匀浆，于4℃ 12,000×g条件下离心20 min。取 mL上清液，加入2 mL 0.6%的2-硫代巴比妥酸（TBA）溶液，混合后煮沸 min，冷却后再离心一次。分别测定反应液在450 nm、532 nm和600 nm处的吸光度值，按下式计算反应混合物中MDA的浓度，然后计算出果实样品中MDA含量。MDAμmol ·g FW-1表示）。 反应液中CMDA（(mol/L）= 6.45×（OD532-OD600）-0.56×OD450 式中 CMDA—反应混合液中丙二醛浓度，μmol/L； V—样品提取液总体积，mL； Vs—测定时所取样品提取液体积，mL； m—样品质量，g Hodges D M, DeLong J M, Forney C F, et al. Improving the thiobarbituric acid reactive-substance assay for estimating lipid peroxidation in plant tissues containing anthocyanin and other interfering compounds. Planta. 1999, 207: 604-611. 5. NADPH氧化酶活性测定 参照Morre et al.（2000）方法提取细胞膜微膜囊。取3.0 g果肉组织，加入5mL提取液，在冰浴中充分研磨，用四层纱布过滤，滤出液于4℃、7500 r/min离心15min，上清液于4℃、18000 r/min离心40 min，沉淀用1 mL悬浮液稀释，得到粗的细胞膜微膜囊提取液。 其中，提取液含：25 mmol/L Mes-Tris（pH7.8）、0.25mol/L蔗糖、3mmol/LEDTA、0.9％PVP、5mmol/LDTT、1mmol/LPMSF；悬浮液含：5mmol/LTris-Mes(pH7.8)、0.25mol/L蔗糖、5mmol/LKCl、5mmol/LDTT、1mmol/LPMSF。 NADPH氧化酶活性测定：参照Sag