基因诊断与基因治疗.资料.pptVIP

（四）自杀基因治疗 将“自杀基因”导入宿主细胞中，这种基因编码的酶能使无毒性的药物前体转化为细胞毒性代谢物，诱导靶细胞产生“自杀效应”，从而清除肿瘤细胞。为恶性肿瘤基因治疗的主要方法之一。 自杀基因的类型 胸苷激酶基因thymidine kinase(TK) 胞嘧啶脱氨酶基因cytosine deaminase(CD) 5-FC 5氟胞嘧啶 5-FU 5氟尿嘧啶 CD Ganciclovir,GCV 丙氧鸟苷 TK GCV-ATP 丙氧鸟苷三磷酸 自杀基因的旁观者效应 “自杀基因”治疗不仅使转导了“自杀基因”的肿瘤细胞在用药后被杀死，而且与其相邻的未转导“自杀基因”的肿瘤细胞也被杀死。 （五）基因免疫治疗(基因疫苗) 定义 通过将抗癌免疫增强细胞因子（TNF,干扰素，IL-2)或MHC基因导入肿瘤组织，以增强肿瘤微环境中的抗癌免疫反应。 三、基因治疗的基本程序 治疗性基因的选择 基因载体的选择 靶细胞的选择 基因转移 外源基因表达的筛选 利用在体中的标记基因 回输体内 病毒载体 非病毒载体 体细胞 生殖细胞 间接体内疗法 直接体内疗法 （一）选择治疗基因 许多分泌性蛋白质如生长因子、多肽类激素、细胞因子、可溶性受体（人工构建的去除膜结合特征的受体），以及非分泌性蛋白质如受体、酶、转录因子的正常基因都可作为治疗基因。 简言之，只要清楚引起某种疾病的突变基因是什么，就可用其对应的正常基因或经改造的基因作为治疗基因。 （二）基因载体的选择 基因治疗关键步骤之一，是将治疗基因高效转移入患者体内、并能调控其适度表达。 病毒载体：逆转录病毒(RV)、腺病毒(AV)、腺相关的病毒(AAV)等。 非病毒载体：这类载体的发展较快，目前主要是脂质体。 （三）靶细胞的选择 ---- 分为生殖细胞和体细胞两大类,现阶段只限于应用体细胞 靶细胞选择的原则: 1.易操作; 2.易培养; 3.易接受外源基因; 4.在体内能持久高效表达 目前常用的靶细胞包括：成纤维细胞、淋巴细胞、上皮细胞、造血细胞、肝细胞、肌细胞等 （四）基因转移方法 化学方法——磷酸钙沉淀法、DEAE-葡聚糖法 物理方法——电穿孔法、粒子轰击法（基因枪） 病毒法——主要通过携带有外源基因的病毒载体感染靶细胞来实现基因的转移。 膜融合法——细胞融合法、脂质体介导法、原生质体融合法、微细胞核介导法等 间接体内疗法 目的基因转移到体外培养的靶细胞内高效表达，然后将靶细胞回输体内 直接体内疗法 将目的基因在体内直接转移到靶细胞 载体：需要有特异导向性和高转移效率 将治疗基因导入人体 载体 目的基因 in vivo ex vivo 靶细胞 （五）治疗基因表达的检测 无论以何种方法导入基因，都需要检测这些基因是否能被正确表达。被导入基因的表达状态可以用PCR、RNA印迹、蛋白印迹及ELISA等方法去检测。对于导入基因是否整合到基因组以及整合的部位，可以用DNA印迹技术进行分析。 （六）回输体内 方式：静脉注射、肌注、皮下注射、滴鼻等 基因修饰的淋巴细胞以静脉注射的方式回输到血液中； 将皮肤成纤维细胞以细胞胶原悬液注射至患者皮下组织； 采用自体骨髓移植的方法输入造血细胞； 或以导管技术将血管内皮细胞定位输入血管等。 腺苷脱氨酶(ADA, Adenosine Deaminase) )缺乏的严重联合免疫缺陷(SCID, severe combined immunodeficiency syndrome) 病因 淋巴细胞缺乏ADA酶 腺苷、dATP堆积 破坏免疫功能 患儿很少活到成年 (bubble-baby syndrome; very low T cell counts) 治疗基本步骤: ADA基因+逆转录病毒载体 导入患者淋巴细胞 体外扩增 回输病人体内 淋巴细胞ADA酶恢复至正常水平的5%-10% 维持免疫系统功能,改善病人症状 基因治疗成功范例 ADA缺乏症基因治疗 1990年9月 , 一位四岁的ADA缺乏症女孩接受了首例基因治疗 患者注入10亿个遗传修饰的T淋巴细胞, 约每月1次, 连续1年, ADA水平从1%上升到20%, 淋巴细胞数量正常, 免疫功能正常 1991年,另一位9岁患者基因治疗也取得成功, 他们从隔离病房走向了美好生活. 肿瘤的细胞疗法 CIK细胞：细胞因子诱导的杀伤细胞（Cytokines-induced killer cells）； CIK细胞是人体内正常的具有很强杀伤肿瘤细胞作用的免疫T淋巴细胞，但数量很少，在患肿瘤后略有所增加； 体外增殖培养CIK细胞到9-10亿数量后，回输人体，以