蔗糖酶理论讲授资料.ppt

* * * * * * * * * * * * * * * * * Food Chemistry, 2006, 99: 299–304 page 300 Hydrolysis of sucrose by invertase immobilized on nylon-6 microbeads. One international unit (IU) of activity was defined as 1.0 μmol of hydrolyzed sucrose per minute under the assay conditions. Sucrose hydrolases from the midgut of the sugarcane stalk borer Diatraea saccharalis One unit of enzyme was defined as the amount of enzyme hydrolysing 1 μmol of substrate min-1. Journal of Insect Physiology, 2004, 50: 1093–1101 page 1094 附1： 酶活力定义的文献 * 溶液A：1g碳酸钠溶于50ml 0.1mol/L氢氧化钠中。 溶液B：将1%硫酸铜和2%酒石酸钠（钾）等体积混合之即成。 Folin 试剂甲：将溶液A 50ml与溶液B 1ml，混合之即成。(用时当天配制) Folin 试剂乙：在 1.5L 容积的磨口瓶中，加入 100g 钨酸钠 (Na2WO4·2H2O) 以及 700ml蒸馏水，再加入 50ml 85% 磷酸及 100ml 浓盐酸，充分混合，接上回流冷凝管，以小火回流 10 小时。回流完毕，加入 150g 硫酸锂，50ml 蒸馏水及数滴液溴，开口继续沸腾15 分钟，以便除去过量的溴，冷却后用蒸馏水稀释至 1000ml，过滤，滤液呈微绿色，置于棕色试剂瓶中保存。使用时用标准氢氧化钠滴定，以酚酞为指示剂，最后用蒸馏水稀释（约1倍左右），使最终酸度为1.0mol/L。 附2： Lowry法测定蛋白浓度 （溶液配置） * 附3：本实验的注意事项 1、这个实验较大，涉及到的理论知识和实验技术都比较多用的时间也很长，要求同学们一定做好预习，把预习过程中有问题的部分记下，实验之前和老师或同学讨论。 2、写好预习报告，要求简洁明了(并留出记录实验数据和实验现象的位置)，否则将严重影响实验进度！ 3、本实验从一开始，就要纵观全局，在各个环节都要注意防止酶失活，只要时间允许，一定要用测定酶活力的方法去跟踪 4、重复实验时，注意条件的严格一致性。 5、在实验过程中，必须认真对待每一个测定的点，任何一个数据的丢失，都将直接导致整个实验数据分析的失败。 6、本实验中未考察到的其它因素(如：移液管、操作人员、反应时间、测试仪器等)一定要严格控制，保持固定不变。 7、实验时一定要按照预习步骤和仪器使用操作规程操作。 * 附4：思考题 1、指出有机溶剂分级沉淀法原理及操作中的注意事项？ 2、如何将本实验的酶活力单位换算成国际单位？ 3、凝胶过滤分离大分子物质的机理是什么？ 4、制备合格的离子交换柱应注意哪几点？ 5、在使用紫外检测系统装置时，有哪些操作事项是应该注意 到的？ 6、说明米氏常数的物理意义及单位？ 7、用双倒数法测定Km值时，应注意的主要问题是什么？ * * 滕利荣主编. 生物学基础实验. 2008年再版. 李建武主编. 生物化学实验原理和方法. 北京大学出版社. 1994 该书中的：p36-46 (离子交换层析法) 沈同，王镜岩主编. 生物化学 第二版 上册高等教育出版社. 1993. 该书中的：p 209、210、215、216、220 中的有关论述 张树政主编.酶制剂工业(上册) . 科学出版社 .1998 附5：主要参考资料 * 人有了知识，就会具备各种分析能力， 明辨是非的能力。 所以我们要勤恳读书，广泛阅读， 古人说“书中自有黄金屋。 ”通过阅读科技书籍，我们能丰富知识， 培养逻辑思维能力； 通过阅读文学作品，我们能提高文学鉴赏水平， 培养文学情趣； 通过阅读报刊，我们能增长见识，扩大自己的知识面。 有许多书籍还能培养我们的道德情操， 给我们巨大的精神力量， 鼓舞我们前进。 * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 蔗糖酶活力的测定： 操作： ① 取两支试管分别加入用 pH4.6, 0.2mol/L 的醋酸缓冲液适当稀释过的酶液 2ml，一支中加入 0.5ml 1mol/L的 NaOH，摇匀，使酶失活（做对照），另一支做测定管；把两支试管和 5% 的蔗糖溶液放入