食品微生物检验学实验指导技术报告.docVIP

食品微生物检验学实验指导 课时分配及主要实验内容(总学时30,其中动检20,动食安30) 实验1 微生物检验常规试验预备实验2 菌落总数测定实验3 大肠菌群MPN测定实验4 蜡样芽孢杆菌检验实验 致病性球菌检验实验 魏氏梭菌检验 3 主要内容：1）形态及染色特性观察；2）细菌厌氧培养；3）家兔“泡沫肝”试验 实验7 霉菌检验实验 肉的微生物学检验实验 乳的微生物学检验实验 食品中沙门氏菌的检验实验 微生物检验常规试验预备1.熟悉各种培养基的制备。 2.熟悉玻璃器皿的包装与灭菌。1）配制700 mL生理盐水（0.9%NaCl），分别分装与5个盐水瓶，每瓶90 mL；分装18支试管，每管9 mL。 2）配制乳糖胆盐培养基（发酵管）200 mL，并分装于小试管各3 mL，每管中加入一个充满培养基的小倒管，注意一定不能有气泡。（配方：2%蛋白胨，0.5%猪胆盐，1%乳糖，调pH7.4，然后加入0.4%溴甲酚紫2.5ml/100ml） 3）配制普通琼脂培养基400ML，分装于2 个三角瓶。（0.5%NaCl，1%蛋白胨，0.3%牛肉粉（膏），pH7.4，琼脂粉1.5%） 4）配制伊红美蓝培养基300 mL。（配方：蛋白胨1%，NaCl 0.5%，牛肉膏0.3%，pH7.4，琼脂粉1.5%，加热溶化后加入乳糖1%、2%伊红水溶液2 mL/1000 mL、0.65%美蓝1 mL/1000 mL） 5）TTC培养基 （1）2%乳糖发酵管40支，每管2.5ml（2%乳糖，2%蛋白胨）。 （2） TTC培养液100ml（2%蛋白胨，1%Nacl，1%Na2HPO4.12H2O,0.4%十二烷基硫酸钠，PH7.4） （3）灭菌后加10%TTC8ml后分装于（1），每管加2.5ml。 6）DC培养基（0.5%蛋白胨，0.5%Nacl，1%乳糖，0.3%K2HPO4.3H2O，0.2%柠檬酸铁铵，琼脂粉0.7%）溶于水后调PH7.2，加入10%去氧胆酸钠 1ml及0.4%溴麝香草酚兰1.6ml。 实验二 菌落总数测定 [目的与要求] 通过本试验要求掌握食品的菌落总数测定的方法，菌落计数和报告方式，以及经常食用的各类动物性食品的菌落总数标准。 菌落总数是指食品检样经过适当处理，在一定的条件下培养后，所得1g或1mL检样中所含细菌菌落的总数，其也是判定食品被污染程度的标志。 [实验器材及试剂] 温箱、天平、灭菌试管、吸管、灭菌平皿、乳钵、剪子和镊子、稀释液、营养琼脂、显微镜、载玻片、革兰氏染色液，等。 [实验内容] （一）检样稀释及培养： 1. 以无菌操作，将检样 2 5 g（或 2 5mL）剪碎放于含有 2 5 0 mL（或 2 2 5 mL）灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内（瓶内预置适当数量的玻璃珠）或灭菌乳钵内，经充分振摇或研磨作成1： 10的均匀稀释液。 2. 用1mL灭菌吸管，吸取1：10稀释液1mL，注入含有9mL灭菌生理盐水的试管中振摇试管混合均匀，作成1：100倍稀释。 3. 另取lmL灭菌吸管，按（2）操作10倍递增稀释，如此每递增稀释一次换一只1mL灭菌吸管。 4根据卫生标准要求或对样品污染情况的估计，选择2～3个适宜稀释度，分别在作10倍递增稀释的同时，用吸取该稀释度的吸管移1mL稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度作2个平皿。 5. 稀释液移入平皿后，应立即将冷至46 ℃左右营养琼脂培养基（可放置46℃ 水浴中保温）注入平皿约15mL，并转动平皿使混合均匀，同时将营养琼脂培养基倾入加有lmL灭菌稀释液的灭菌平皿内，作空白对照。 6. 待琼脂凝固后，翻转平板，置37℃温箱内培养2 4±2h时（肉、水产、乳、蛋为 48±2h）取出，计算平皿内菌落数，乘以稀释倍数，即得每g（mL）样品所含菌落总数。 （二）菌落计数方法 作平板菌落计数时，可用肉眼观察，必要时用放大镜观察，以防遗漏。在记下各皿的菌落数后，求出同稀释度的各皿平均菌落数。 （三）菌落计数的报告 包括三步。 1．平板菌落数的选择 选取菌落数在30～ 3 0 0之间的平板作为菌落总数测定标准。一个稀释度使用两个平板应采用两个平板平均数，其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数，若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平