精英班育种专题训练技术报告.docVIP

精英班育种问题专题训练 1．嗜热土壤芽胞杆菌产生的β-葡萄糖苷酶（BglB）是一种耐热纤维素酶，为使其在工业生产中更好地应用，开展了以下试验： Ⅰ.利用大肠杆菌表达BglB酶 （1）PCR扩增bglB基因时，选用 基因组DNA作模板。 （2）右图为质粒限制酶酶切图谱。bglB基因不含图中限制酶识别序列。为使PCR扩增的bglB基因重组进该质粒，扩增的bglB基因两端需分别引入 和 不同限制酶的识别序列。 （3）大肠杆菌不能降解纤维素，但转入上述建构好的表达载体后则获得了降解纤维素的能力，这是因为 。 Ⅱ.温度对BglB酶活性的影响 （4）据图1、2可知，80℃保温30分钟后，BglB酶会 ；为高效利用BglB酶降解纤维素，反应温度最好控制在 （ A.50℃ B.60℃ C.70℃ D.80℃ Ⅲ.利用分子育种技术提高BglB酶的热稳定性 在PCR扩增bglB基因的过程中，加入诱变剂可提高bglB基因的突变率。经过筛选，可获得能表达出热稳定性高的BglB酶的基因。 （5）与用诱变剂直接处理嗜热土壤芽胞杆菌相比，上述育种技术获得热稳定性高的BglB酶基因的效率更高，其原因是在PCR过程中 （多选）。 A.仅针对bglB基因进行诱变 B.bglB基因产生了定向突变 C.bglB基因可快速累积突变 D.bglB基因突变不会导致酶的氨基酸数目改变 2．若用两种识别切割序列完全不同的限制酶E和F从基因组DNA上切下目的基因(1.2kb)，并将之取代质粒pZHZ1(3.7kb，1kb＝1000对碱基)上相应的EF区域(0.2kb)，形成重组质粒pZHZ2，请据图回答下列问题： 图7－16－1 (1)限制酶E和限制酶F在结构和功能上的不同之处分别在于①________________； ②__________________。 (2)pZHZ2所含有的碱基对数为________kb。 (3)将重组质粒pZHZ2导入至山羊的受精卵细胞中，若pZHZ2进入细胞后插入在一条染色体DNA上，那么获得转基因纯合子山羊的方式是__________。 (4)上述目的基因模板链中的TGA序列对应一个密码子，翻译时识别该密码子的tRNA上相应的反密码子碱基序列是______。 【答案】(1)蛋白质分子的结构不同(氨基酸的种类、数目、排列顺序、蛋白质的空间结构不同) 识别的核苷酸序列不同 (2)4.7 (3)转基因山羊间相互交配 (4)UGA 3、科学家用植物细胞杂交方法，将番茄的原生质体和马铃薯的原生质体融合，成功地培育出了“番茄-马铃薯”杂种植株，如图1所示，其中①～⑤表示过程，英文字母表示细胞、组织或植株。育种工作者还利用番茄进行了如下三组实验如图2.。据图回答下列问题： (1)实现过程②的技术是 ，在此之前使用 酶处理细胞以除去细胞壁。过程③原生质体经过 再生，与此密切相关的细胞器为_ 。 (2)过程②后，在显微镜下观察融合的活细胞中有供体的 存在，这一特征可作为初步筛选杂种细胞的标志。 (3)若番茄细胞内有m条染色体，马铃薯细胞含n条染色体，则“番茄-马铃薯”细胞内含________条染色体；若杂种细胞培育成为“番茄-马铃薯”植株为四倍体，则此杂种植株的花粉经离体培育得到的植株属于________倍体植株。 (4)如果形成c细胞的a、b细胞都是番茄细胞，那么更简单的得到番茄植株f的处理方法是 。 (5)若杂种植株在有丝分裂在过程中，仅保留番茄的染色体而马铃薯的染色体会不断丢失，采用特异性引物对番茄和马铃薯基因组DNA进行PCR扩增，得到两亲本的差异性条带，可用于杂种植株的鉴定。图3是用该引物对双亲及4棵再生植株1～4进行PCR扩增的结果。据图判断，再生植株1～4中一定是杂种植株的有（多选） 。 (6)用红果多室(Yymm)番茄植株的花粉进行Ⅱ、Ⅲ有关实验，则Ⅱ过程中，培育植物体B的方法(Ⅱ)称为_______。植物体C的基因型有_________。（细胞A为两两融合细胞，写出具体的基因型。） (8)三种育种得到的植物体A、B、C中一定为纯合体的是 。 【答案】(1)原生质体融合 纤维素酶和果胶 细胞壁 高尔基体（线粒体） (2)叶绿体 (3)m+n 单 (4)用秋水仙素处理萌发的种子或幼苗 (5)1、2、4 (6)单倍体育种 YYmm或Yymm或yymm (8)植物体B 8．（16分）