微生物实验考核内容及汇总技术报告.docVIP

微生物实验考核内容及汇总 考核一 1.1?大体观 1.1.1葡萄球菌鉴别??（?白色?金黄色?柠檬黄） 1.1.2血琼脂平板 1.1.3?SS琼脂平板 1.1.4?生化管试验 （1）糖发酵试验 原理:多糖－→单糖－→丙酮酸－→酸性产物(或产酸产气)－→pH↓?－→指示剂呈酸性变色(若产气者有气泡出现) 培养基：糖发酵管、半固体发酵管、微量发酵管（我们实验一般只用糖发酵管，不区分产气与否） 试剂：酚红、溴甲酚紫等 结果：若糖发酵管颜色呈?紫色，则为阴性； 呈 黄色，则为阳性 应用：观察细菌对糖度的?分解情况，常用于肠道杆菌的鉴定 注：钟老师在课上，还提到一种双糖试验。如果现象为培养基为黄色，则为肠道非致病菌，上红下黄色，则为肠道致病菌，其他的记不得。 （2）硫化氢试验： 原理：细菌分解蛋白质中的含硫氨基酸，生成硫化氢，硫化氢与培养基中的铁盐或铅盐结合生成黑色络合物。 培养基：含硫酸亚铁或醋酸铅的培养基 结果：培养基??变黑?为阳性； 不变黑 为阴 应用：常用于肠道杆菌的鉴定 （3）靛基质试验（吲哚试验）： 原理：细菌产生色氨酸酶，可分解蛋白胨中的色氨酸，生成靛基质（吲哚），靛基质与试剂对二甲基氨基苯甲醛作用，生成玫瑰靛基质。 培养基：蛋白胨水 试剂：靛基质试剂（含对二甲基氨基苯甲醛） 结果：加入试剂后，培养基交界面出现玫瑰红色，为阳性 培养基交界面为黄色或浅红色：为阴性 （注：如果要鉴别，要自己动手加试剂哦） 应用：用于肠道杆菌的鉴定 （4）尿素酶试验 原理：产生脲酶的细菌，能水解尿素生成氨和CO2，氨使培养基呈碱性变色。 培养基：尿素培养基 试剂：酚红指示剂 结果：培养基变红：阳性 培养基不变色?阴性 应用：肠杆菌科属间鉴定 总结阳性现象：糖发酵 黄色；硫化氢 黑色；靛基质加试剂变玫瑰红?；?尿素酶 红色 1.1.5?动力实验 动力阳性??穿刺线清晰周围培养基澄清穿刺线模糊细菌向周围扩散生长，培养基浑浊 1.1.6?真菌菌落 真菌能分泌酶使有机物降解成可溶性营养成分，吸收至细胞内进行新陈代谢。大多数真菌营养要求不高，在沙保氏培养基(Sabourauds?smedium?含4%葡萄糖?1.0%蛋白胨?pH4.0～6.0?)，22～28生长良好。大多于1～2周出现典型菌落。真菌菌落一般有三种类型。1．酵母型菌落，为单细胞真菌的菌落，形态与一般细菌菌落相似，以出芽形式繁殖，如新型隐珠菌。2．类酵母型菌落，外观似酵母菌落，但可见伸入培养基中的假菌丝，它是由伸长的芽生孢子形成，如白色念珠菌。3．丝状菌落，为多细胞真菌的菌落，由许多菌丝体组成。菌丝多数有隔分成多个细胞称有隔菌丝，有的菌丝无隔，称无隔菌丝。部分菌丝伸入培养基中吸收营养和水分，称营养菌丝；另一部分菌丝向空间生长称气中菌丝，能产生孢子的气中菌丝称生殖菌丝。有些真菌的气中菌丝形状特殊，呈球拍状、螺旋状、鹿角状等是各种皮肤丝状菌鉴别的依据之一。丝状菌落呈棉絮状、绒球状、粉末状或石膏粉样，在下面和背面可显示各称不同色素。 1.1.7亚碲酸钾血琼脂平板 含有0.033%亚碲酸钾血清培养基上在生长繁殖能吸收碲盐，并还原为金属碲，使菌落呈黑色，为本属其他棒状杆菌共同特点。且亚碲酸钾能抑制标本中其他细菌的生长，故亚碲酸钾血琼脂平板可作为棒状选择培养基。 1.2镜下观 鞭毛?荚膜??异染颗粒（不算细菌的特殊结构，但是考试有要求） Ｇ＋　蓝色（下图为葡萄球菌） Ｇ－　红色 考核二：油镜使用 （1）将集光器上升到最高位置，光圈开到最大。 （2）转动转换器，使高倍镜头离开通光孔，在需观察部位的玻片上垂直滴加一滴香柏油，然后慢慢转动油镜，在转换油镜时，从侧面水平注视镜头与玻片的距离，使镜头浸入油中而又不以压破载玻片为宜。 （3）用左眼观察目镜，并慢慢转动细调节器至物象清晰为止。 （4）观察，分辨视野中的为革兰阳性菌（蓝色），还是阴性菌（红色），并填在卷子上 （5）油镜使用完毕，先用擦镜纸沾少许二甲苯将镜头上和标本上的香柏油擦去，然后再用干擦镜纸擦干净。 考核三 3.1接种细菌（详情可见实验指导P63~65，以下内容较繁琐） （一）【材料】1．大肠埃希菌和葡萄球菌混合液2．琼脂平板【方法】??????? 琼脂平板培养的方法很多，现以分区划线接种法为例。此方法可通过划线分离，充分利用培养基表面，分离出单个生长的菌落。1.在平板的底部用记号笔写上组别、标本名称或编号、日期等记号。右手握持接种环?(执笔式)通过火焰灭菌，冷却后，取一接种环上述细菌混合液。3.再以左手握持平板培养基，使平板略呈垂直方向，并靠近火焰周围，以免空气中杂菌落入。然后将蘸有菌液的接种环，先在培养基一角涂成薄膜，即1区。4.烧灼接种环，以杀死环上剩余的细菌，冷却后，将接种环再通过区薄膜处作连续划线（使环面与平板表面成45度角，