培养基适用性检查方法的验证技术报告.docVIP

培养基适用性检查方法的验证 文件编号 制订 日期 审核 日期 批准 日期 云 南 云 科 药 业 有 限 公 司 A： 验证方案 方案制订 制订日期 方案编号 方案审核 审核日期 方案批准 批准日期 云 南 云 科 药 业 有 限 公 司 目录 验证项目名称 验证组织 概述 验证目的 参照标准 验证程序 验证报告、评价及批准 验证项目名称：培养基适用性检查方法的验证 验证组织： 姓名 部门 职务 分工 概述： 通过验证以确认所采用的方法适合于培养基适用性检查。根据培养基及菌的特性制订检验方法和检验条件，按制定的方法进行试验，根据验证结果判断是否符合验证标准。若符合，按验证的方法和条件进行培养基适应性检查；若不符合，重新建立制订检验方法和检验条件，再进行验证，直至验证结果符合设立的验证标准。 验证目的： 细菌、霉菌及酵母菌计数用培养基应进行培养基的适用性检查。验证的目的是确认营养琼脂培养基和玫瑰红钠琼脂培养基适合细菌、霉菌及酵母菌数测定。（确认所采用的方法适合于培养基适应性检查，为了保证检验结果的准确性，对现有的检验方法进行验证。） 参照标准： 2010年版《中国药典》二部 附录ⅪJ 计数培养基的适用性检查。 6.验证程序： 6.1适用范围：适用于培养基适用性检查。 6.2被验证产品：营养琼脂培养基和玫瑰红钠琼脂培养基。 6.3试验材料： 6.4试验菌株： 6.5合格标准：被检培养基上的菌落平均数不小于对照培养基上的菌落平均数的70%，且菌落形态大小与对照培养基上的菌落一致。 6.6验证方法： 培养基在使用前应进行适用性的检查，通过对被检培养基上的菌落与对照培养基上的菌落比较，以确认所采用方法的可行性。 6.6.1菌液的制备： 6.6.1.1 接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中，于30～35℃培养18～24小时。取上述营养肉汤新鲜培养物1ml加入9ml0.9%无菌氯化钠溶液中，10倍稀释至10-5～10-7约为50～100cfu/ml 的菌悬液备用。 6.6.1.2接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基中，于23～28℃培养24～48小时。取上述改良马丁新鲜液体培养物1ml加入9ml0.9%无菌氯化钠溶液中，10倍稀释至10-5约为50～100cfu/ml的菌悬液备用。 6.6.1.3接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基上，于23～28℃培养5～7天，加入3～5 ml含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后，采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含孢子数50～100cfu/ml的孢子悬液备用。 6.6.2菌液的计数：（每种菌液接种2个平皿） 6.6.2.1分别接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌各2皿，每皿接种1ml菌液（含菌50～100cfu），倾注营养琼脂培养基，凝固后于30～35℃倒置培养48小时。 6.6.2.2分别接种白色念珠菌2皿，每皿接种1ml菌液（含菌50～100cfu），倾注玫瑰红钠琼脂培养基，凝固后于23～28℃倒置培养72小时。 6.6.2.3菌落计数结果（2个平皿计数取平均值）见下表： 菌落计数结果（cfu/ml） 试验次数 10-5 10-6 10-7 1 2 平均 1 2 平均 1 2 平均 大肠埃希菌 金黄色葡萄球菌 枯草芽孢杆菌 白色念珠菌 6.3适用性检查 6.3.1营养琼脂培养基 6.3.2玫瑰红钠琼脂培养基 6.3.3胆盐乳糖培养基 6.3.4结果（见下表） 6.4结论 培养基适用性检查验证记录 试验时间 年 月 日 试验时间 年 月 日 试验菌株 平皿号 供试品组 cfu/ml 对照培养基组 cfu/ml 回收率应≥70% 大肠埃希菌 （培养3天计数） 1 2 平均 金黄色葡萄球菌 （培养