2014选修三高考真题技术方案.docVIP

（2014海南）[生物——选修3：现代生物科技专题]（15分） 下图是将某细菌的基因A导入大肠杆菌内，制备“工程菌”的示意图。 据图回答： 获得A有两条途径：一是以A的mRNA为模板，在 酶的催化下，合成互补的单链DNA，然后在 的作用下合成双链DNA，从而获得所需基因；二是根据目标蛋白质的 序列，推测出相应的mRNA序列，然后按照碱基互补配对原则，推测其DNA的 序列；再通过化学方法合成所需基因。 利用PCR技术扩增DNA时，需要在反应体系中添加的有机物质有 、 、4种脱氧核糖核苷三磷酸和耐热性的DNA聚合酶，扩增过程可以在PCR扩增仪中完成。 由A和载体B拼接形成的C通常称为 。 在基因工程中，常用Ca2+处理D，其目的是 。 【答案】（1）逆转录 DNA聚合酶 氨基酸（每空2分，共6分） 脱氧核苷酸（2分，其他合理答案也给分） 引物 模板DNA（每空1分，共2分） 重组DNA（2分，其他合理答案也给分） 提高受体细胞的转化率（3分，其他合理答案也给分） 【解析】（1）在逆转录酶的催化下，以基因A产生的mRNA为模板可以获得与mRNA互补的单链DNA，以该单链DNA为模板，在DNA聚合酶的作用下可合成双链DNA；根据目标蛋白质的氨基酸序列，根据密码表可推测出相应的mRNA序列，然后根据碱基互补配对原则可推测出其DNA中的脱氧核苷酸序列，再通过化学方法利用DNA合成仪合成所需基因。 利用PCR扩增目的基因时，需要提供目的基因作为模板，添加引物对来引导子链的形成，添加四种脱氧核糖核苷三磷酸（即dCTP、dATP、dGTP、dTTP）作为原料，耐高温的DNA聚合酶来催化子链的形成；扩增过程可在PCR扩增仪中完成。 目的基因A和运载体B拼接形成的C通常称为基因表达载体（重组质粒）。 基因工程中，常用Ca2+处理细菌细胞，使之成为感受态细胞，容易吸收周围环境中的DNA分子，进而使重组质粒导入细菌细胞内。 （2014山东）36.（12分）【现代生物科技专题】人组织纤溶酶原激活物（htPA）是一种重要的药用蛋白，可在转htPA基因母羊的羊乳中获得。流程如下：  （1）htPA基因与载体用_________切割后，通过DNA连接酶连接，以构建重组表达载体。检测目的基因是否已插入受体细胞DNA，可采用_________技术。（2）为获取更多的卵（母）细胞，要对供体母羊注射促性腺激素，使其__________。采集的精子需要经过__________，才具备受精能力。（3）将重组表达载体导入受精卵常用的方法是__________。为了获得母羊，移植前需对已成功转入目的基因的胚胎进行__________。利用胚胎分割和胚胎移植技术可获得多个转基因个体，这体现了早期胚胎细胞的__________。（4）若在转ht-PA基因母羊的羊乳中检测到__________，说明目的基因成功表达。 【答案】（1）同种限制性核酸内切酶（或同种限制酶）； DNA分子杂交（或核酸探针）（2）超数排卵； 获能（处理）（3）显微注射法； 性别鉴定； 全能性（4）htPA（或人组织纤溶酶原激活物） 【解析】（1）用同种限制酶切割质粒和含有htPA基因的DNA片段可产生相同的黏性末端，便于构建基因表达载体；通常采用DNA分子杂交技术来检测目的基因是否已插入受体细胞DNA。 为获得更多的卵母细胞，通常对供体母羊注射促性腺激素使其超数排卵；采集的精子需要经过获能处理才具备受精能力。 通常用显微注射法将重组表达载体导入动物的受精卵；为了获得母羊，移植前需要对已成功转入目的基因的胚胎进行性别鉴定；早期胚胎细胞具有全能性，可利用胚胎分割和胚胎移植技术获得多个转基因个体。 ht—PA基因的表达产物为人组织纤溶酶原激活物，若在转基因母羊的羊乳中检测到人组织纤溶酶原激活物，说明目的基因成功表达。33.[生物-现代生物科技专题]必答题（10分） Rag2基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞。科研人员利用胚胎干细胞（ES细胞）对Rag2基因缺失小鼠进行基因治疗。其技术流程如图： （1）步骤①中，在核移植前应去除卵母细胞的 。 （2）步骤②中，重组胚胎培养到 期时，可从其内细胞团分离出ES细胞。 （3）步骤③中，需要构建含有基因Rag2的表达载体。可以根据Rag2基因的 设计引物，利用PCR技术扩增Rag2基因片段。用HindIII和PstI限制酶分别在片段两侧进行酶切获得Rag2基因片段。为将该片段直接连接到表达载体，所选择的表达