Chapter四分子分析及重组机制解读.ppt

* * 上、下 左、右 G A C T G A C T .. G A T C. G A T C * * G（+） A（g） T A G C A G 丢失 不配对碱基的两种修复校正方式 修复过程 核酸外切酶切除不配对碱基 DNA多聚酶填补 DNA连接酶连接 野生型（+） 突变型（g） * * C A G G C T A T T C G C G A A T +/+ +/+ g/g g/g C G C G G C A T +/+ +/+ +/+ g/g 两个杂种分子都校正到+或g时 6:2或2:6 正常校正 4:4 染色单体转变 C T C G G C A T +/+ +/+ +/g g/g C A G G C T A T +/+ +/g +/g g/g 均未校正 3:1:1:3 一个校正为+，或为g 5:3或3:5 半染色单体转变 A. B. C. D. * * * * 基因转变的实质是异源双链DNA错配核苷酸对在修复较正过程中发生的一个基因转变为他的等位基因现象。 * * Section 6 异常重组—转座遗传因子 染色体DNA上某些序列可以移动到基因组的其他位置上去——转座元件或转座子. * * 一、转座元件的发现 20世纪70年代夏皮罗(Shapiro)用E. coli乳糖操纵子突变株进行杂交分析后，才确认转座子的存在。 1932年，美国学者Barbara McClintock发现玉米籽粒色素斑点的不稳定遗传行为。1951年首次提出在染色体上移动的“控制元件”或“控制因子”（controlling element）的概念。后来就把具有类似结构和功能的元件称为转座因子，也曾称为跳跃基因。 * * P galT galE galK 半乳糖差向异构酶 半乳糖尿苷酰转移酶 半乳糖操纵子 * * 密度梯度离心实验，证实突变的DNA中确实有插入片段。称之为IS1（insertion sequence1） 突变gal 野生型gal IS1 * * 分子杂交实验：含有IS2的半乳糖操纵子与野生型DNA杂交： * * 二、原核生物的转座子 1、插入序列( IS， insertion sequence) 最简单的转座元件，是细菌染色体和质粒的正常组成成分，有很多不同的IS，序列各不相同，但两端都有反向重复序列（IR），都能编码自身转座所需的酶。 * * 例如：IS10结构： * * 2. Tn转座子（transposon elements，Tn ） 3、转座噬菌体（略） 是一类复合性转座因子，它带有同转座无关的基因（如抗药性基因），转座子两端有反向或正向重复的IS。 * * 转座子在转座位点会产生正向重复序列： * * 三、真核生物转座子 1、果蝇中的转座子——P因子（P element） I3 E0 E1 E2 I1 I2 E3 IR IR ① 4个外显子（E） ② 3个内含子（I） ③ 两端各一个反向重复（IR） 只在生殖细胞中实现转座。 在体细胞中虽然也转录，但转录出的产物没有转座酶活性！ * * 66KD蛋白是转座的抑制物。（在P型雌果蝇的卵细胞质中大量存在，而且稳定；M型雌果蝇中没有）。 87kDa蛋白是转座酶：使P因子转座，导致不育。 * * * * 在玉米籽粒颜色形成时 如果有C基因，胚乳合成色素，呈紫色； 如果C突变（c），胚乳无色素，呈白色。 2. 玉米转座子Ac-Ds * * 控制籽粒色素斑点的激活因子—解离系统（activator-dissociation system，Ac-Ds系统）： 激活因子—Ac：能合成转座酶的自主移动的调节因子，并能支配受体因子移动。 解离因子—Ds：能产生有效转座酶的非自主移动的受体因子。 * * W: white（C基因） * * * * * * 四、转座的遗传学效应 插入突变 产生新的基因； 染色体畸变 生物进化 * * * 包含八个单倍体囊孢子的子囊菌 Conidia 分生孢子 Mating 植物等的杂交 * * n a n a 则着丝粒、n、a在染色体上的排列方式为： * * a、n两个单独发生交换之比为90/1000∶5/1000=18，而RF比值为9.3/5.05=1.84 ，18远远大于1.84，所以两基因不可能位于着丝粒异侧。 3、判定两基因在染色体的同臂还是异臂？ 同侧 √ * * 100% × = 1/2×T+NPD T+PD+NPD RF(n-a) × = 1/2(9