第三章课用蛋白质结构与功能的关系要点.pptVIP

20世纪60年代初，美国科学家C.Anfinsen进行牛胰核糖核酸酶的变性和复性实验，提出了蛋白质一级结构决定空间结构的命题。 核糖核酸酶由124个氨基酸残基组成，有4对二硫键。用尿素和β-巯基乙醇处理该酶溶液，分别破坏次级键和二硫键，肽链完全伸展，变性的酶失去催化活性；当用透析方法去除变性剂后，酶活性几乎完全恢复，理化性质也与天然的酶一样。 概率计算表明，8个半胱氨酸残基结合成4对二硫键，可随机组合成105种配对方式，而事实上只形成了天然酶的构象，这说明一级结构未破坏，保持了氨基酸的排列顺序就可能回复到原来的三级结构，功能依然存在。 分子病是指机体DNA分子上基因缺陷引起mRNA分子异常和蛋白质生物合成的异常，进而导致机体某些功能和结构随之变异的遗传病。 在1904年，发现镰刀状红细胞贫血病。大约化费了40多年才清楚患病原因，患者的血红蛋白（HbS）与正常人的（HbA）相比，仅β-链的第6位上，Val取代了正常的Glu。目前全世界已发现有异常血红蛋白400种以上。 （五）蛋白质前体的激活与一级结构 Mb与Hb的氧合曲线不同，Mb为一条双曲线，Hb是一条 S型曲线。在低p(O2)下，肌红蛋白比血红蛋白对氧亲和性高很多，p(O2)为2.8torr(1torr≈133.3Pa)时，肌红蛋白处于半饱和状态。在高p(O2)下，如在肺部（大约100torr）时，两者几乎都被饱和。其差异形成一个有效的将氧从肺转运到肌肉的氧转运系统。 Hb未与氧结合时，其亚基处于一种空间结构紧密的构象（紧张态，T型），与氧的亲和力小；而R态对氧具有明显较高的亲和力，氧的结合使R态更稳定。 在血红蛋白中，其4个亚基与氧分子的亲和性不同。氧分子与血红蛋白的一个亚基结合后，就能使4个亚基间的盐键断裂，变成松弛的构象（松弛态，R型），引起其构象发生改变，这种变化在亚基之间传递，从而改变了其他亚基与氧的结合能力，使它们与氧的结合变得容易。 T型和R型的相互转换对调节Hb运氧的功能有重要作用。一个亚基与其配体结合后能促进另一亚基与配体的结合是正协同效应，其理论解释是Hb是别构蛋白，有别构效应。 常用沉淀方法 ： ⒈盐析法(salt-out)：中性盐（硫酸胺、硫酸钠和氯化钠）使蛋白质脱去水化层而聚集沉淀。 ⒉有机溶剂沉淀： 甲醛、乙醇、丙酮，引起蛋白质脱去水化层，降低介电常数，增加带电质点的相互作用引起沉淀。 ⒊重金属盐沉淀：大于等电点时，蛋白质颗粒带电荷，容易与金属离子形成不溶性的盐。 例如，误服重金属盐的病人可以口服大量的牛乳和豆浆等蛋白质进行解救，它能和重金属离子形成不溶性盐，在服催吐剂排出体外。 4、生物碱试剂和酸类 生物碱试剂：能引起生物碱沉淀的试剂，如：单宁酸、苦味酸、钼酸、钨酸等，与蛋白质形成盐类沉淀。 酸类，如三氯醋酸、磺基水杨酸和硝酸等，与蛋白质形成盐类沉淀。 5、加热变性沉淀法 加热使蛋白质的天然结构解体，疏水基外露，破坏水化层；少量盐可以加速蛋白质凝固。如豆腐的制作工艺。 蛋白质变性后的絮状物加热可变成比较坚固的凝块，此凝块不易再溶于强酸和强碱中。 造成变性的因素: 如加热、乙醇等有机溶剂、强酸、强碱、重金属离子及生物碱试剂等 。 变性的本质: ——破坏非共价键和二硫键，不改变蛋白质的一级结构。 应用举例: 临床医学上，变性因素常被应用来消毒及灭菌。 此外, 防止蛋白质变性也是有效保存蛋白质制剂（如疫苗等）的必要条件。 若蛋白质变性程度较轻，去除变性因素后，蛋白质仍可恢复或部分恢复其原有的构象和功能，称为复性(renaturation) 。 蛋白质沉淀：在一定条件下，蛋白疏水侧链暴露在外，肽链融会相互缠绕继而聚集，因而从溶液中析出。变性的蛋白质易于沉淀，有时蛋白质发生沉淀，但并不变性。 蛋白质的凝固作用(protein coagulation) * * 蛋白质结构与功能的关系 The Relation of Structure and Function of Protein 第三章 一、蛋白质一级结构是高级结构与功能的基础 牛核糖核酸酶的一级结构 二硫键 （一）一级结构是空间构象的基础 1960年牛胰核糖核酸酶可逆变性实验：核糖核酸酶在尿素和巯基乙醇处理下成无规卷曲，活性丧失；透析去除尿素或巯基乙醇后核糖核酸酶活力恢复，８个巯基氧化重新形成4个二硫键准确无误。 核糖核酸酶RNase的变性与复性 天然状态，有催化活性 尿素、 β-巯基乙醇 去除尿素、 β-巯基乙醇 非折叠状态，无活性 胰岛素 氨基酸残基序号 A5 A6 A10 B30 人 Thr Ser Ile Thr 猪 Thr Ser Ile Ala 狗 Thr Ser Ile Ala 兔 Thr Gly Ile Ser 牛 Ala