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激光扫描共聚焦显微技术 Laser scanning confocal microscopy 激光扫描共焦显微镜的设计特点: 1.点照明,具有照明pinhole和探测pinhole 2.照明pinhole和探测pinhole共轭(共焦), 共焦点即被探测点，被探测点所在的平面为共焦平面 3.具有扫描系统—— 逐点扫描成像 4. 激光作为光源 5.具有多个（四个） 荧光通道，可同时探测多个被标记物 人眼分辨率： 0.2mm 光学显微镜分辨率：0.25mm 电子显微镜分辨率：0.2nm 共焦显微镜分辨率：0.18mm 电子显微镜的缺点： 1.由于样品需要固定,观测活细胞十分困难. 2.样品制备过程（固定、包埋、切片）造成的假象 荧光显微镜的缺点: 1.无法实现对荧光,透射光的同时采集,无法实现多荧光的同时采集 2.荧光散射光太强，造成实际分辨率的大大下降。 3.荧光漂白很快，使荧光图像的拍照有困难。 4.无法对样品进行断层扫描,完成3D的工作. 5.对于信号较弱的样本,无法提高观察的灵敏度. 6.可以观查活细胞或组织但细胞或组织内结构高度重叠 激光共聚焦显微镜的应用 单、双、三,四色标记检测。 精确的一、二、三、四维观察。 高品质的荧光成像、透射成