乳酸菌的分离纯化毕业设计-1详解.docVIP

LUOYANG NORMAL UNIVERSITY 2015届毕业论文 乳酸菌的分离纯化及抑菌实验 院（系）名称 生命科学学院 专业名称 生物技术 学生姓名 勾倩倩 学号 111344045 指导老师 易力副教授 完成时间 2015年5月7日 乳酸菌的分离纯化及抑菌实验 勾倩倩 生命科学学院 生物技术专业 学号：111344045 指导教师：易立 副教授 摘要：本文对乳酸菌的分离纯化，革兰氏染色以及抑菌实验进行阐述，从市售酸菜中分离纯化得到乳酸菌，革兰氏染色进行鉴定，最后进行金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑菌实验！实验主要是分离纯化，革兰氏染色，最后用抑菌实验比较单菌株的抑菌能力。 关键词：乳酸菌：分离纯化；革兰氏染色；抑菌 乳酸菌 (LA B ，Lactic acid bacteria)是指能使碳水化合物(主要为葡萄糖)发酵产生大量乳酸的细菌的通称，这类细菌生长在矿物质和有机营养丰富的微酸性环境中[1,2]。在自然界中比较常见，用途广泛，它可以改善食物的风味，并延长食品的货架期，作为保健食品和药品，可以改善和提高人的健康水平，延年益寿，还可以作为微生物学和微生态学领域研究的模式生物[3]。酸菜是世界性大众化蔬菜腌制品,在我国历史悠久[4]，其自然发酵的主要菌群是乳酸菌[5]。人体在摄人发酵酸菜时，也同时摄入了大量的乳酸菌体及其代谢产物[6]。乳酸菌是酸菜发酵过程中的有益菌，在发酵速度以及发酵产品品质等方面都起到至关重要的作用。因此在微生物学和食品科学的研究中，对酸菜中乳酸菌进行鉴定是必要的[7]。 本实验从酸菜中分离纯化得到6株乳酸菌（1,2,3,4,5,6）， 进行革兰氏染色，为紫色杆状，最后进行抑菌实验，比较6株乳酸菌的抑菌能力。 1 材料与仪器 1.1 菌种 乳酸菌 1.2 样品来源 市售新鲜酸菜 1.3 培养基 （1）乳酸菌分离培养基（固体MRS培养基）：蛋白胨5g，酵母膏2.5g，牛肉膏5g，葡萄糖10g，磷酸氢二钾1g，柠檬酸铵1g，乙酸钠2.5g，硫酸镁0.29g，硫酸锰0.125g，吐温80 0.5 mL，琼脂8.5g，蒸馏水500mL，pH7.0 （2）乳酸菌纯化培养基：MRS培养基+1%的碳酸钙溶液（碳酸钙1g，蒸馏水100mL） （3）乳酸菌富集培养培养基（液体MRS培养基）：蛋白胨5g，酵母膏2.5g，牛肉膏5g，葡萄糖10g，磷酸氢二钾1g，柠檬酸铵1g，乙酸钠2.5g，硫酸镁0.29g，硫酸锰0.125g，吐温80 0.5 mL，蒸馏水500mL，pH7.0 （4）抑菌实验培养基（牛肉膏蛋白胨培养基）：牛肉膏1.5g，蛋白胨5g，NaCl 2.5g，琼脂粉7.5g，水500mL，pH7.2 1.4 仪器及用具 恒温培养箱，高压蒸汽灭菌锅，超净工作台，培养皿，锥形瓶，移液枪，涂布棒，接种针 2 方法与过程 2.1 酸菜中菌种的分离培养（平板涂布法） 吸取汤汁0.1ml，加入9ml无菌水中进行100倍稀释，依次做5个梯度，每个梯度分别取0.2ml涂布于灭好菌MRS培养基中，并尽快用无菌玻璃涂棒将菌液在平板上涂布均匀，然后用封口膜封住培养皿，平放于试验台上20 min，然后倒置于37℃恒温箱中培养48h。 2.2 酸菜中菌种的纯化培养（平板划线法） 48h无菌条件下，从培养基中挑选不同的菌落，放入1.5ml无菌水中稀释，用接种环挑取菌液，用平板划线法接入含有1%碳酸钙的MRS培养基，用封口膜密封培养皿，倒置放在37℃恒温培养箱中培养48小时。 2.3 革兰氏染色 在洁净的载玻片上加蒸馏水一滴，然后用接种环分别挑选取少量培养基透明圈中的单菌落与水滴混匀，涂开，而后将此玻片在酒精灯火焰上通过3—4次，使细菌固定在载玻片上。然后，加草酸铵结晶紫液，染1—2min，水洗并除尽水滴。然后在涂片上滴加碘液，染1—2min除尽水滴。而后在涂片上，滴加复红乙醇溶液，维持1min，水洗，用吸水纸轻轻吸干，最后进行油镜镜检。 5 讨论 乳酸菌(LAB)及发酵产物数千年的利用历史及无毒副作用的优良品质使其被认为是GRAS(generally recognized as safe 公认安全) 菌[8]。其发酵产物也是安全物质，特别是乳酸菌产生的细菌素具有光谱抑菌的作用，在将来能够替代化学防腐剂保藏食品，故乳酸菌及其发酵产物在食品工业上有极好的应用前景[9]。近年来乳酸菌分离成为一个热门研究方向。 本文从市售酸菜中分离出来6株具有抑菌效果的乳酸菌，在实验过程中，要注意整个过程无菌操作，防止杂菌污染。乳酸菌需要厌氧环境，需要用保鲜膜包裹。 参考文献： [1 ] 杨洁彬．乳酸菌一生物学基础及应用 [M ]．北京：中国轻工业出版社，1996：235—214． [2 ]