基于Staphylococcus_省略_缩酶在大肠杆菌合成稀有酮糖的研究_李子杰pdf.docVIP

研究报告 DOI: 10． 13995 / j． cnki． 11 － 1802 / ts． 201508002 基于 Staphylococcus carnosus 来源的 D-果糖-1，6-二磷酸 醛缩酶在大肠杆菌合成稀有酮糖的研究* 李子杰，贺贝贝，高晓冬 ( 江南大学 生物工程学院，糖化学与生物技术教育部重点实验室，江苏 无锡，214122) 摘 要 将 Staphylococcus carnosus 来源的 FruAS. car 醛缩酶基因 fda 和大肠杆菌来源的 YqaB 磷酸酶基因 yqaB 分 别插入到表达质粒 CDFDuet-1 得到重组质粒 CDF-fda-yqaB，并转化该重组质粒到大肠杆菌 BL21Star( DE3) 。以 同时过量表达 FruAS. car 醛缩酶和 YqaB 磷酸酶的大肠杆菌 BL21Star ( DE3) / CDFDuet-1-fda-yqaB 作为发酵菌株， 以葡萄糖为碳源通过糖酵解途径在胞内生成供体磷酸二羟基丙酮，分别在培养基中添加丙醛、丁醛为受体，进行 相应稀有酮糖的合成，从而成功地将羟醛缩合反应在大肠杆菌中实现，酮糖产物用 HPLC 检测并进行纯化和1 H NMＲ 鉴定。最后，以13 C 同位素全标记的葡萄糖为碳源，添加丙醛为受体进行了同位素标记实验，证实了产物从 DHAP 而来的 3 个碳原子最终来自葡萄糖。 关键词