酶与蛋白质工程-刘资料.doc

名词解释： 一级结构：蛋白质多肽链中氨基酸残基的排列顺序。是蛋白质最基本的结构，并由基因上遗传密码的排列顺序决定。 二级结构：一段连续的肽单位借助于氢键，排列成的具有周期性结构的构象。包括α-螺旋、β-折叠、回折、环肽链、无规则卷曲等。是多肽链主链区域的规则结构，不涉及侧链构象和与多肽链其他部分的关系 结构域：二级结构和结构模体以特定的方式组织连接，在蛋白质分子中形成2个或多个在空间上可以明显区分的三级折叠实体。 α-螺旋两亲性：α-螺旋一侧主要分布着亲水（极性）氨基酸残基，而在另一侧主要集中疏水残基，所以具有两亲性。 三级结构：蛋白质的多肽链在各种二级结构的基础上再进一步盘曲或折叠形成具有一定规律的三维空间结构。是多肽链上所有原子包括主链和残基的侧链在三维空间中的分布 分子伴侣：是一种引导蛋白质正确组装、折叠的蛋白，但不构成被介导蛋白质的组成 第二遗传密码：氨基酸顺序与蛋白质三维结构之间存在着的对应关系称为第二遗传密码或折叠密码 同源蛋白质：在不同生物体中具有相同或相似功能的蛋白质称为同源蛋白质 蛋白质分子设计：为有目的的蛋白质工程改造提供设计方案 Scaffold设计：即框架设计，是指对蛋白质分子的立体设计 定点突变：一般是知道要突变位点的情况下，应用PCR方法通过引物将突变引入DNA分子从而改变氨基酸序列。 定向进化：采用随机的基因突变或基因重组技术与定向的突变体筛选方法相结合的分子进化技术。 内含肽：在蛋白质成熟过程中被剪切掉的一段框内融合于前体蛋白的氨基酸序列。 融合蛋白标签：用于重组蛋白质的纯化，目的蛋白质的检测和定向固定等应用的一类蛋白质或多肽，作为构建融合蛋白的标签 易错PCR：一种利用PCR技术简便快速在DNA序列中随机制造突变的方法，其基本原理是通过改变正常PCR反应体系中某些组分的数量或质量，随机引入错误碱基从而创造序列多样性的DNA序列文库。 DNA shuffling：DNA改造，单个基因或一组相关基因经酶切产生一系列随机大小的DNA片段的随机突变方法。 硫酸铵分级沉淀：由于不同的蛋白质沉淀所需要的盐离子浓度不同，因此通过调节硫酸铵的浓度可使不同的蛋白质分阶段沉淀下来，这就是硫酸铵分级沉淀 分子筛层析：是以多孔性凝胶材料为支持物，根据蛋白质分子大小不同，导致阻滞作用不同而先后流出支持物，从而达到分离纯化目的的一种层析方法。 亲和层析：利用蛋白质与配体专一性识别并结合的特性而分离蛋白质的一种层析方法。 电泳（EP）：带电颗粒在电场作用下，向着与其电性相反的电极运动，称为电泳 噬菌体表面展示技术：是将目的基因克隆在丝状噬菌体衣壳蛋白的基因中，使外源基因产物与衣壳蛋白融合，伸展在噬菌体表面，用来直接检测表达产物活性的一种基因表达筛选技术 酵母表面展示技术：将外源靶蛋白基因(外源蛋白)与特定的载体基因序列融合后导入酵母细胞，利用酵母细胞内蛋白转运到膜表面的机制使靶蛋白固定化表达在酵母细胞表面。 蛋白质芯片：也叫蛋白质微阵列，是将大量蛋白质有规则地固定到某种介质载体上，利用蛋白质与蛋白质、酶与底物、蛋白质与其他小分子之间的相互作用检测分析蛋白质的一种芯片。 表面等离子体共振（SPR）：是表面等离子体在金属和电介质的交界面上形成的一电荷层，在电磁波的作用下，表面等离子体发生共振的现象。 蛋白质组：指基因组表达的全部蛋白质及其存在方式。 蛋白质组学：定量检测蛋白质水平上的基因表达，从而揭示生物学行为以及基因表达调控机制的学科 蛋白质组丰度：某种蛋白质在蛋白质组中 该方法必须在特定的待突变位点和上下游分别设计引物，引物A、B为上下游引物，分别与模板链互补，引物C、D为具有互补序列的突变引物，先以引物B、C在一定条件下进行PCR，得产物BC，再以引物A、D进行PCR得产物AD，混合这两个扩增产物，以A、B为引物进行PCR，即可得到带突变点的DNA片段。 在大肠杆菌中影响外源基因表达的因素有哪些？如何在大肠杆菌实现外源基因高效表达？ 启动子的强弱：较强的、能够由一些简单并经济合算的方式诱导启动、控制的本底转录低的启动子，如T7启动子 转录终止区：有效的转录终止子 mRNA稳定性：通常用非常强的启动子来弥补不稳定的mRNA转录物 密码子偏好性：根据其表达所需的密码子偏好性选择相应的载体，或对载体进行适当修饰 表达定位：当在细胞外周质和外分泌表达产物时，有利于目的蛋白的纯化，减少细菌对其的降解，实现高效表达； 宿主选择：选择正确的宿主菌，对外源基因在原核系统中的表达水平会产生一定的影响； 培养条件控制：大肠杆菌的蛋白质产量可以通过高细胞密度培养系统而获得显著提高。 重组蛋白质的表达系统主要有哪些？各自的优缺点是什么？ 同基因工程制药大题第十题 书 P43 Western-blotting的主要实验原理、操作步