发酵工业菌种制备原理和技术课件.pptVIP

本章内容 一、常用的工业微生物菌种选育 二、工业微生物种子的扩大培养 三、种子培养基及其制备 一．工业常用微生物 细菌：枯草杆菌，短杆菌，大肠杆菌 酵母：酿酒酵母（啤酒，葡萄酒），酒精酵母，假丝酵母 霉菌：黑曲霉，土曲霉，米曲霉，红曲霉，根霉，木霉，青霉 放线菌：单孢菌 其他：藻类 最常用的工业微生物 细菌 枯草芽孢杆菌 醋酸杆菌 棒状杆菌 短杆菌 大肠杆菌 最常用的工业微生物 酵母菌 酿酒酵母 假丝酵母属 产朊假丝酵母 解脂假丝酵母 热带假丝酵母 毕赤酵母属、汉逊酵母属 最常用的工业微生物 霉菌 曲霉属 米曲霉 黑曲霉 青霉属 青霉菌：点青霉、产黄青霉 桔青霉 根霉属 德氏根霉 米根霉、小麦曲根霉 红曲霉属 紫红曲霉 最常用的工业微生物 放线菌 链霉菌属 小单孢菌属 地中海诺卡氏菌 米苏里游动放线菌 微生物工业对菌种的要求 能在廉价原料制备的培养基上迅速生长和生成所需的代谢产物产量高。 培养条件易于控制 生长迅速，发酵周期短 满足代谢控制的要求 抗噬菌体能力强 菌种不易变异退化 安全性（不是病源菌，不产毒素） 微生物菌种保藏机构名称和缩写 种子扩大培养定义 种子扩大培养：是指将保存在砂土管、冷冻干燥管中处于休眠状态的生产菌种接入试管斜面活化后，在经过扁瓶或摇瓶及种子罐逐级放大培养而获得一定数量和质量的纯种过程。 这些纯种培养物称为种子。 种子制备的过程大致可分为： 实验室种子制备阶段 生产车间种子制备阶段 实验室种子的制备一般采用两种方式 固体培养基培养孢子 液体培养法 （1）种子罐的作用： 主要是使孢子发芽，生长繁殖成菌（丝）体，接入发酵罐能迅速生长，达到一定的菌体量，以利于产物的合成。 （2）种子罐接种： 微孔接种法 火焰保护法 压差法 （3）种子罐级数的确定 种子罐级数：是指制备种子需逐级扩大培养的次数，取决于： 菌种生长特性、孢子发芽及菌体繁殖速度； 所采用发酵罐的容积 细菌：生长快，种子用量比例少，级数也较少，二级发酵。 茄子瓶→种子罐→发酵罐 霉菌：生长较慢，如青霉菌，三级发酵 孢子悬浮液→一级种子罐（27?C,40小时孢子发芽，产生菌丝 ）→二级种子罐（ 27?C,10~24小时，菌体迅速繁殖，粗壮菌丝体）→发酵罐 放线菌：生长更慢，采用四级发酵 酵母：比细菌慢，比霉菌，放线菌快，通常用一级种子 （5）接种量 接种量的大小决定于生产菌种在发酵罐中生长繁殖的速度。 通常接种量，细菌1~5%，酵母菌5~10%，霉菌7~15%、有时20~25%。 3、发酵工业种子培养 ⑴静置培养法（厌气性发酵）； ⑵通气性培养（好气性发酵）； 作为种子扩大培养的方法： ① 表面培养法 ② 固体培养法 ③液体培养法（三角瓶摇床震荡或转式培养）； ④载体培养法 固体培养法（曲法培养） 优点： （1）酶活力高。 （2）生产过程中无菌程度要求不很严格。 （3）对于固体发酵，由于产物浓度大，易于分离，可以有效的降低产品分离成本。 缺点： （1）生产劳动强度较大，占地面积大，不宜自动化生产。 （2）周期长。 （3）培养过程中环境条件控制较难。 （4）生产过程中，由于无菌程度较低，其菌种不纯。 液体深层培养法 优点： （1）生产效率高，便于自动化管理。 （2）生产过程中温度、溶氧、pH值等参数可以实现全面控制。 （3）通常生产液体种子，整个生产周期较短。 缺点： （1）无菌程度要求高，相对生产设备投资较大。 （2）对于某些种类的发酵，液体培养因投资大、生产密度大而难以实现。 几种深层培养法 ①放大法 ②两步法 ③控制培养法 ④分批培养法(间歇发酵法) ⑤连续培养法 ⑥补料分批培养法(流加法) 4、种子质量的控制措施 种子质量的最终指标是考察其在发酵罐中所表现出来的生产能力。 菌种稳定性的检查 无杂菌检查 主要是碳源、氮源、无机盐、生长素和水等。 糖份少而氮源多些(菌体增殖为主要目的) 。 与发酵培养基的主要成分相近 温度过低，菌种生长发育缓慢 温度过高会使菌丝过早自溶 湿度低，孢子生长快； 湿度大，孢子生长慢 选择最适种子培养pH的原则是获得最大比生长速率和适当的菌量 培养最后一级种子的培养基的pH应接近于发酵培养基的pH，以便种子能尽快适应新的环境 溶解氧的作用：参与菌体呼吸作用 搅拌：促进氧的溶解与营养物质及代谢产物的分散。 通气量的多少以溶解氧的多少来衡定（溶解氧浓度应不低于临界溶氧浓度）。 通气过程中，影响溶解氧的因素：菌种（丝状影响最大）；培养基性质；培养阶段；发酵罐的结构； 危害：影响微生物对氧的吸收；妨碍CO2的排除；减少设备利用率（有效容积减少）；造