第八章色层分离详解.ppt

（4）层析介质的洗涤 恒流泵 紫外检测器 自动部分收集器 电脑记录 缓冲液2 换缓冲液 关闭分部收集器用烧杯收集 洗涤至基线走平15秒/滴 通去离子水冲洗管路 去离子水 （5）凝胶再生和保养 (1)多次使用后重新装填。 (2)短期不用,加0.02%叠氮化钠(NaN3)。 (3)长期不用, 酒精浸泡脱水,然后60—80℃烘干。 8.4.4洗脱操作（展开操作） 加入洗脱剂而使样品中各组分分离的操作称为展开。 展开操作的方式有多种，在实际使用中选择何种操作方式主要取决于： （1）样品的性质； （2）所需产品的纯度； （3）要求的产率。 下面将介绍几种常用的展开方式。 前沿分析法 ——前沿分析法中，样品连续不断地输入色谱柱，即样品溶液本身起流动相的作用。 A A+B A+B+C 0 溶质总浓度 流出液体积 设混合液中，溶质A、B、C与固定相的作用力为：A＜B＜C 开始时，溶质全部吸收在固定相 内，流出液为纯溶剂； 经一段时间洗脱后，与固定相作用力最弱的A物质首先被洗出，出现第一个阶梯； 随后作用力较强的B物质和更强的C物质也先后流出，形成第二个、第三个阶梯，直至稳定不变。 前沿分析的特点: （1）前沿分析法只能得到其中作用 力最弱的纯物质，因而一般不 用于混合物的分离。 （2）适合于在产品的精制中除去痕 量杂质。 （3）分离过程中样品溶液本身就是 流动相 ，其流出液中的组分 浓度不变。 A A+B A+B+C 0 溶质总浓度 流出液体积 采用前沿分析法可测定样品的吸附等温曲线 设样品溶液中只含有一种溶质组分。 开始时，溶质被固定相所吸附，从柱中流出不含溶质的为纯溶剂，此段时间所流出的纯溶剂量称为溶质的保留容积Vr。 当溶质在固定相中达饱和状态后，不再吸附溶质，此时溶质开始流出，且浓度与进料一样。 0 溶质浓度 流出液体积 C Vr 由Vr可计算出柱中固定相所吸附的溶质浓度： 式中：c为样品溶液中（流动相）溶质的浓度； Vs 为固定相的有效体积。 在一定温度下，改变流动相溶质的浓度，测定其保留容积Vr，再计算出固定相所吸附的溶质浓度q，即可绘制吸附等温曲线。 0 溶质浓度 流出液体积 C Vr 置换展开法 置换展开法又名顶替法或取代法。样品输入色谱柱后，用一种与固定相作用力极强的置换剂作为流动相，去替代结合在固定相表面的溶质分子。 在置换展开法中，最先从柱中被置换出来的是作用力最弱的溶质，最后出来的是置换剂本身。 0 溶质浓度 流出液体积 A B 置换剂 置换展开法特点： （1）各组分的浓度在展开过程中 不但不会降低，有时甚至还 能提高，即起到浓缩作用； （2）固定相的利用率较高； （3）各组分一个连一个流出，界 限不甚分明，因而分离并不 理想； （4）合适的置换剂不易找到 。 0 溶质浓度 流出液体积 A B 置换剂 洗脱展开法 样品输入色谱柱后，随即加入一种不与固定相发生作用的溶剂或几种溶剂的混合物作为流动相冲洗。 以流出液体积对溶质浓度作图，为由一系列的峰组成的曲线，每一个峰对应于一个组分，最先出现的峰是与固定相作用力最弱的溶质，以后顺次出现的峰其溶质与固定相的作用力顺次增加。 0 溶质浓度 流出液体积 A B 洗脱展开法特点： （1）峰的面积与溶质含量成正比，由此 可作定量分析； （2）组分的保留容积为开始加入样品至 该组分峰顶出现时所流出的液体体 积，由此可作定性分析； （3）当两组分的保留容积差别较大时， 两组分可完全分开，因而洗脱展开 是展开操作中应用最广的一种方 法； （4）当两组分的保留容积差较小时，会 出现重叠峰或峰间不清，常可采用 梯度洗脱法等消除； （5）洗脱展开时，样液不断被流动相冲 稀，组分浓度有所下降。 VrA VrB 0 溶质浓度 流出液体积 A B 溶质浓度 VrA 0 流出液体积 A B VrB 8.5 径向色谱 为了增加色谱分离的产量，必须对色谱柱进行放大。放大的方法一是增加柱长；二是加大柱径。 增加柱长时，随着色谱柱长度的增加，样品的保留时间延长，压力也增加，可见用此法提高产量是有限的。 目前比较常用的方法是逐渐增加柱直径。但实践表明，随着色谱柱直径的增加，分离效率下降。