色谱法导论课后复习祥解.pptVIP

色谱法导论（2） 化学化工学院 杨 睿 例2：用3m长的填充柱得到如图所示的色谱图，为获得 Rs＝1.5的分离度，填充柱至少需要多少米? 例3：有一根 1m长的柱子，分离组分1和2得到如下色谱图。若欲得到 R=1.2的分离度，有效塔板数应为多少？色谱往要加到多长？ 例6：已知物质A和B在一个30.0cm柱上的保留时间分别为16.40和17.63分钟.不被保留组分通过该柱的时间为1.30分钟.峰宽为1.11和1.21mm,计算: (1)?? 柱分辨率;(2)?? 柱的平均塔板数目;(3)?? 塔板高度;(4)?? 达到1.5分离度所需的柱长度;(5) 在较长柱上把物质B洗脱所需要的时间. 例7：用一根固定相的体积为0.148mL，流动相的体积为1.26mL的色谱柱分离A,B两个组分，它们的保留时间分别为14.4min，15.4min，不被保留组分的保留时间为4.2min，试计算：（1）各组分的容量因子（2）各组分的分配系数（3）AB两组分的选择因子a §18-5 色谱定性和定量分析 为什么大多数色谱图不是对称的高斯峰？ 增大进样量，色谱峰增大，半高峰宽会变大吗？为什么？ 峰宽与柱效的关系 （一）利用纯物质保留值对照定性 （二）相对保留值法 （三）加入已知物增加峰高法 （四）保留指数定性法 （五）其它方法 如红外光谱法（IR）、质谱法（MS）、核磁共振波谱法（NMR）等结合进行定性鉴定。 （2）校正因子 相对校正因子： 相对校正因子的测定方法 相对校正因子值只与被测物和标准物以及检测器的类型有关，而与操作无关。因此一般说来可自文献中查出引用。若文献中查不到所需的值也可自己测定。测定相对校正因子最好用色谱纯试剂。 3. 定量计算法 如果试样中所有组分均能流出色谱柱，并在检测器上都有响应信号，都能出现色谱峰，可用此法计算各待测组分的含量。 归一化法简便，准确，进样量多少不影响定量的准确性，操作条件的变动对结果的影响也较小，尤其适用多组分的同时测定。但若试样中有的组分不能出峰，则不能采用此法。 (2) 内标法 为了减少称量和测定校正因子可采用内标标准曲线法 ——简化内标法： 在一定实验条件下，待测组分的含量mi与Ai/As 成正比例。先用待测组分的纯品配置一系列已知浓度的标准溶液，加入相同量的内标物；再将同样量的内标物加入到同体积的待测样品溶液中，分别进样，测出Ai/As，作 Ai/As—m 或Ai/As—C 图，由Ai（样）/As 即可从标准曲线上查得待测组分的含量。 (3) 外标法 取待测试样的纯物质配成一系列不同浓度的标准溶液，分别取一定体积，进样分析。从色谱图上测出峰面积（或峰高），以峰面积（或峰高）对含量作图即为标准曲线。然后在相同的色谱操作条件，分析待测试样，从色谱图上测出试样的峰面积（或峰高），由上述标准曲线查出待测组分的含量。 即某组分i的相对校正因子fi’为组分i与标准物质s的绝对校正因子之比 (1) 归一化法 在试样中加入一定量的纯物质作为内标物来测定组分的含量。内标物选用试样中不存在的纯物质，其色谱峰位于待测组分色谱峰附近或几个待测组分色谱峰的中间，并与待测组分完全分离，内标物的加入量接近试样中待测组分的含量。具体作法是准确称取m（g）试样，加入ms（g）内标物，根据试样和内标物的质量比及相应的峰面积之比计算待测组分的含量。 内标法的优点是定量准确。因为该法是用待测组分和内标物的峰面积的相对值进行计算，所以不要求严格控制进样量和操作条件，试样中含有不出峰的组分时也能使用，但每次分析都要准确称取或量取试样和内标物的量，比较费时。 外标法是最常用的定量方法。其优点是操作简便，不需要测定校正因子，计算简单。结果的准确性主要取决于进样的重视性和色谱操作条件的稳定性。 * 色谱峰的区域宽度与组分的保留时间一般呈线性关系 影响色谱带展宽的其他因素 (1) 非线性色谱 (2) 活性中心的影响 (3) 柱外效应 例4：已知某色谱柱的理论塔板数为3600,组分A和B在该柱上的保留时间为27mm和30mm,求两峰的半峰宽和分离度。 一、定性分析 二、定量分析 ——根据峰位置 ——根据峰面积 一、定性分析 保留值定性的依据：相同的物质在相同的色谱条件下应该有相同的保留值 注意：相反的结论不一定成立 实验方法：在相同的色谱条件(色谱柱、流动相组成、柱温、流速等不变)下分别测定被测化合物与标准样的保留值，如果保留值相等, 就可初步认为被测化合物为标准样化合物。 如何提