高效液相色谱仪流程及主要部件课件.pptVIP

仪器分析课程讲义 第三章 高效液相色谱分析 目录 §3-7高效液相色谱仪主要部件(2)梯度淋洗装置 又称梯度洗提、梯度洗脱，与气相色谱中的程序升温一样，可极大地改善分离效果 载液中含有两种及以上的不同极性（或不同性质）的溶剂，在分离过程中按照一定的程序连续改变载液中溶剂的配比和极性，通过载液中极性的变化来改变被分离组分的分离因素。 通过梯度洗脱，可缩短分离时间、提高分辨能力、改善峰形，还可提高分析精度。 §3-7 高效液相色谱仪主要部件 (4) 高效分离柱 柱体为直型不锈钢管，内径1～6 mm，柱长5～40 cm。发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。 装柱方法：有干法和湿法两种，按粒度20μm划分，湿法装柱又称匀浆法。 §3-7 高效液相色谱仪主要部件 §3-7 高效液相色谱仪主要部件(5) 液相色谱检测器e. 电导检测器（electrical conductivity detector） §3-8 高效液相色谱的应用 application of HPLC1. 环境中有机氯农药残留量分析 §3-8 高效液相色谱的应用 application of HPLC2. 稠环芳烃的分析 §3-8 高效液相色谱的应用 application of HPLC3. 阴离子的分析 * * 2004-11-25 §3-6 高效液相色谱流程 §3-7 高效液相色谱仪主要部件 §3-8 高效液相色谱仪的应用实例 §3-6 高效液相色谱流程 §3-6 高效液相色谱流程 一、 高压输液泵 用于输送流动相，由于色谱柱很细、为了获得高柱效而使用粒度很小的固定相（10μm）、流动液的扩散系数远小于气体，故液体的流动相高速通过时，液体流动时阻力很大，必须要有很高的柱前压力。 压力：150～350×105 Pa，高压、高速是高效液相色谱的特点之一。 流量稳定（影响重现性及分析精度）、流速可调 应具有压力平稳、脉冲小、耐腐蚀等特性 §3-7 高效液相色谱仪主要部件 高压泵按其性质可分为恒压泵、恒流泵两类 1）往复式柱塞泵：广泛使用的一种恒流泵，柱塞反复进出缸体，100次/min。可通过改变冲程（柱塞进入缸体中距离的大小）或往复的频率来调节流量；易于更换溶剂，适用于梯度洗脱但有脉冲波动 2）气动放大泵：据液体的压力传导原理而设计，是一种恒压泵 液缸体积大，更换流动相不方便，不适于频繁更换流动相以选择合适溶剂的实验，也不便于梯度洗脱，但能供给无脉冲、稳定流量的输出 (2)梯度淋洗装置 外梯度: 利用两台高压输液泵，将两种不同极性的溶剂按一定的比例送入梯度混合室，混合后进入色谱柱。 内梯度: 一台高压泵, 通过比例调节阀,将两种或多种不同极性的溶剂按一定的比例抽入高压泵中混合。 §3-7 高效液相色谱仪主要部件 §3-7 高效液相色谱仪主要部件 高压定量进样阀：流路中为高压力工作状态，通常使用耐高压的六通阀进样装置，其结构如图所示： 优点：进样准确，重现性好，适于定量分析 (3) 进样装置 注射器进样装置：微量进样器刺过装有弹性隔膜的进样器，针尖直达固定相上端。 缺点：不能承受高压，须停流进样；无法取得精确的保留时间 (5) 液相色谱检测器 紫外检测器: 应用最广，对大部分有机化合物有响应。 作用原理：被分析试样组分对特定波长紫外光的选择性吸收，组分浓度与吸光度的关系遵守比尔定律 特点： 灵敏度高； 线形范围高； 波长可选，易于操作； 对流动相的流速和温度变化不敏感； 应用可变波长检测器（流通池装有紫外或紫外可见分光光度计），以选择最佳检测波长。 §3-7 高效液相色谱仪主要部件 §3-7 高效液相色谱仪主要部件 (5) 液相色谱检测器 b. 光电二极管阵列检测器 紫外可见光度检测器的重要进展； 1021个二极管阵列，各检测某一特定波长，无需停流扫描而观察色谱柱流出物的各个瞬间的动态光谱吸收图 §3-7 高效液相色谱仪主要部件 (5) 液相色谱检测器 b. 光电二极管阵列检测器 (5) 液相色谱检测器 c. 差示折光检测器（differential refractive index detector） 除紫外检测器之外应用最多的检测器； 可连续检测参比池和样品池中流动相之间的折光指数差值。差值与浓度呈正比； 通用型检测器（每种物质具有不同的折光指数）； 灵敏度低（10-7g/ml） 、对温度敏感、不能用于梯度洗脱； 偏转式、反射式和干涉型三种 受紫外光激发后能够辐射出比紫外光波长较长的光 高灵敏度