霉菌的观察.docVIP

实验七、霉菌的形态观察 09级生科一班 安明玉（200900140001） 同组者：陈汶灿、陈肖然、程彬、高琳璐、秦瑶 一、实验原理 1.学习并掌握霉菌形态观察法； 2.了解四类霉菌的基本形态。 二、实验原理 霉菌可产生复杂分枝的菌丝体，分基生菌丝和气生菌丝，气生菌丝生长到一定阶段后分化产生繁殖菌丝，由繁殖菌丝产生孢子。 霉菌菌丝比较粗大（菌丝和孢子的直径达到3~10μm），通常是细菌菌体宽度的几倍至几十倍，因而可用低倍、高倍镜观察。霉菌菌丝细胞容易收缩变形，孢子容易飞扬，在制备霉菌标本时，常用乳酸石炭酸溶液作为介质，具有不使细胞变形，可杀菌防腐，不易干燥，能保持较长时间等优点。若加入棉蓝，又具有一定的染色效果。 霉菌的有些结构在制片过程中易被破坏，影响观察，可采用载片培养法。此法便于直接在显微镜下观察，尤其适用于根霉的假根、曲霉的足细胞及分生孢子链等结构的着生和生长情况的观察。并且还可以在同一标本上观察到微生物发育的不同阶段的形态。 霉菌菌丝体（尤其是繁殖菌丝）其孢子的形态特征是分类的重要依据。例如：青霉的繁殖菌丝无顶囊，经多次分枝，产生几轮对称或不对称的小梗，小梗上着生成串的青色分生孢子，的孢子囊形如“扫帚”。而曲霉的分生孢子梗顶端膨大成顶囊，成球形。 　　可以直接挑取生长在平板中的霉菌菌体制成水封片观察。 三、实验材料 1.菌种 根霉（Rhizopus）的斜面培养物， 毛霉（Mucor）的斜面培养物， 曲霉（Aspergillus）的斜面培养物， 青霉（Penicillium）的斜面培养物； 2.实验试剂 马铃薯培养基（PDA）（200mL），甘油，二甲苯，香柏油，95%乙醇，蒸馏水； 3.实验器材 烧杯，玻璃棒，电磁炉，电子天平，称量纸，接种针，三角瓶，U型管，滴管（1mL），解剖刀，滤纸，培养皿，盖玻片，镊子，酒精灯，显微镜，擦镜纸，双层瓶，载玻片。 四、实验操作 小室培养法 1.灭菌 a）如附录所示配制PDA培养基及甘油溶液； b）将培养基、甘油溶液及所需实验器材高温灭菌约30min。 2.琼脂薄片制作 a）将U形管置于培养皿中，再将载玻片置于U形管上； b）用记号笔在培养皿底部外侧画线将其划分为若干1cm×1cm小格； c）点燃酒精灯，往培养皿中倒入少量培养基，培养基厚度要尽量薄； d）待培养基凝固后，用解剖刀沿培养皿底部画线将培养基切成小块； e）将切好的培养基小块置于培养皿中的载玻片上，每片上放两小块。 3.接种 a）点燃酒精灯，在酒精灯火焰上烧接种针杀菌，冷却后，从斜面上蘸取少量霉菌涂在培养基小块边缘，盖上盖玻片，在培养皿侧面贴标签标注菌种，每个菌种接种四个培养基小块； b）滴加2～3滴甘油于培养皿中的滤纸上以保持培养皿中环境的湿润。 4.恒温培养 将接种好的培养皿置于28℃的恒温箱中恒温7天。 5.镜检 在显微镜下观察四类霉菌的形态特征。 五、实验结果 1．霉菌形态观察 图1 根霉的形态观察（10×40） 图2 毛霉的形态观察（a，10×40） 图2 毛霉的形态观察（b，10×40） 图3 曲霉的形态观察（a，10×40） 图3 曲霉的形态观察（b，10×40） 图4 青霉的形态观察（10×40） 2．霉菌形态特征列表 菌种 菌丝有无隔 菌丝特点 有无假根 孢子囊、孢囊孢子的 形态特征 根霉（Rhizopus） 无 从孢子梗基部发出匍匐菌丝 有 假根处向上丛生直立、不分枝的孢囊梗，顶端膨大形成圆形的孢子囊Mucor） 无 从孢子梗基部发出匍匐菌丝 有 菌丝体上直接生出各分枝顶端着生球形Aspergillus） 有 菌丝体产生大量的分生孢子梗分生梗顶端膨大成表面长满一层或两层辐射状小Penicillium） 有 营养菌丝无色或淡色 无 分生孢子梗亦有横隔顶端不形成膨大的顶囊，产生帚状体 答：根霉有匍匐菌丝和假根； 毛霉菌丝体上直接生出、总状分枝或假轴状分枝的各分枝顶端着生球形孢子囊并通过足细胞与营养菌丝相连分枝成帚状的分生孢子从菌丝体伸向空中，各顶端的小梗产生链状的分生孢子 5