实验四叶绿素提取、理化性质和含量测定.pptVIP

提取叶绿体色素 分析叶绿素的物理、化学性质 测定叶绿素的含量 提取和测定植物组织中的光合色素是研究光合作用机理的重要技术手段。 叶绿体色素提取 称取新鲜去大叶脉的菠菜叶片3g，剪碎放入研钵中， 加少量石英砂和碳酸镁及5ml 95％乙醇，研成均浆，过滤入25ml 容量瓶，分别用5ml 95％乙醇冲洗研钵3次，冲洗液同样过滤，收集滤液，倒入容量瓶中，最后用95％乙醇定容至25ml，放入暗处备用。 2. 叶绿素的荧光现象 取叶绿素提取液2ml放入试管中，在直射光下观察溶液的透射光及反射光的颜色有何不同？ （结果与分析1） 3. 光对叶绿体色素的破坏作用 取两支试管，各加入叶绿体色素提取液2ml，一管放在直射光下，另一管放在黑暗处，1～2 h后观察两管溶液颜色有何变化？（结果与分析2） 6. 叶绿体色素含量测定 吸取叶绿体色素提取液5ml，用95%乙醇定容至50ml。以95%乙醇为空白对照，在波长665nm、649nm、652nm下测定吸光度，并分别计算叶绿素a和叶绿素b的浓度（Ca、Cb：mg/L），二者之和为总叶绿素的浓度。 最后，根据下式可进一步求出植物组织中叶绿素的含量： 叶绿素的含量（mg/g）= [叶绿素的浓度×稀释倍数×提取液体积] /样品鲜重 比较两种方法所得的实验结果。 （结果与分析5） * * 设置对照的作用？ [NO2-]处理-对照，[NO2-] B液-A液，准确分析NO3-对NR活性的诱导作用。 B液中NO3-的作用？ 底物，而非诱导作用。 存在问题： 实验3 硝酸盐和光诱导对硝酸还原酶（NR）活性的影响 [ NO2- ] （uMol/ml）= 0.0026＋0.359OD540 NR活性（ NO2- , uMol/h?gfw）= [ NO2- ] ×10ml/1ml ÷（鲜重g×0.5h） H2O 0.028 0.013(0.009) 0.724(0.600) 0.064 0.026(0.020) 1.705(1.333) KNO3 0.042 0.018(0.014) 1.179(0.933) 0.201 0.075(0.069) 4.984(4.600) 对照 0.005 0.004 0.010 0.006 处 理 A 液 B 液 吸光度 [ NO2- ] NR活性 吸光度 [ NO2- ] NR活性 （uMol/ml）（uMol/h?gfw） （uMol/ml）（uMol/h?gfw） [ NO2- ] H2O =1.333-0.600=0.733 [ NO2- ] KNO3 =4.600-0.933=3.667 实验四 叶绿体色素的提取、理化性质与含量测定 1. 实验目的及意义 2.1 用含水的有机溶剂提取叶绿素 2. 实验原理 亲水的“头部”：镁原子居于卟啉环的中央，带正电性，与其相联的氮原子则偏向于带负电性，因而卟啉具有极性，是亲水的，可以与蛋白质结合。 亲脂的“尾巴”：叶绿醇是由四个异戊二烯单位组成的双萜，是一个亲脂的脂肪链，它决定了叶绿素的脂溶性。 纯的有机溶剂不能打破叶绿体色素与蛋白质的联系，所以必须用能与水混溶的有机溶剂并有少量水存在时，才能将叶绿体色素提取出来。 80%丙酮 95%乙醇 丙酮:乙醇:水(4.5:4.5:1) 2.2 叶绿素的物理性质 1）叶绿素的吸收光谱 红光区：640~660 nm 篮紫光区：430~450 nm 胡萝卜素和叶黄素：400~500 nm 不用蓝光区测叶绿素含量。 2）荧光现象 叶绿素溶液在透射光下呈绿色，而在反射光下呈红色的现象。 2.3 叶绿素的化学性质 叶绿素是叶绿酸的酯（叶绿酸是双羧酸，其中一个羧基被甲醇酯化，另一个被叶绿醇酯化）。 叶绿素可以与碱起皂化反应而生成醇（甲醇和叶绿醇）和叶绿酸的盐，产生的盐能溶于水中，用此法可将叶绿素与类胡萝卜素分开。 1）皂化反应 皂化分层 叶绿酸的盐形成以后，因分子极性增大，易溶于稀酒精溶液中，不能进入苯层； 而类胡萝卜素在苯中