* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 变性的DNA与蛋白质介于两相的交界面,可使用乙醇和异丙醇分级沉淀出来。 保留于上层水相的RNA,通过异丙醇沉淀与75%乙醇洗涤而制备。 四、商品化的单相裂解试剂法分RNA 目前,该法已成为实验室最常用的总RNA提取法,其产量及质量与前法相当。 Trizol 五、mRNA的分离纯化 除血红蛋白及组蛋白的mRNA外,绝大多数mRNA在其3′末端带有长短不同的poly(A)尾巴。 利用碱基配对原则,通过oligo(dT)-纤维素或poly(U)-琼脂糖凝胶的亲和层析,可以很容易地从总RNA制品中分离纯化mRNA。 1. oligo(dT)-纤维素柱层析法 2. oligo(dT)-纤维素柱离心法 3. oligo(dT)-纤维素液相结合离心法 4. 磁性球珠分离法 (1)oligo(dT)-纤维素层析柱法 (2) oligo(dT)-纤维素液相结合离心法 (3)磁珠分离法 实验步骤 1 每mg组织中加入1mlTrizol试剂,高速破
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