癌旁免疫炎症相关因子及其癌内骨桥蛋白表达和肝癌术后复发关系研析.pdf

博士论文 中文摘要 癌旁免疫炎症相关因子及癌内骨桥蛋白表达与肝癌术后 复发关系的研究 中文摘要 carcinoma，HCC)是世界上最常见、恶性程度 肝细胞癌(Hepatocellular 最高的肿瘤之一，其病死率在全球所有癌症中占第3位。手术切除仍是目前肝癌 获得长期生存的主要手段，但术后5年复发率高达60％以上(小肝癌也达40％--．, 50％)。转移复发已成为进一步延长肝癌病人生存期、提高远期疗效的瓶颈问题， 也是最终攻克肝癌的关键。在肝癌术后病人中区分高、低复发风险人群有相当的 困难，特别是那些没有明显血管侵犯、局部淋巴结转移或远处转移的早期病人。 鉴定相关的分子标签可以为肝癌患者预测临床结果提供额外的有益信息，并为术 后甄别需要接受辅助治疗的病人提供帮助。以往大量研究指出，Thl和Th2类细胞 因子在多种人类恶性肿瘤的进展中起重要作用。此前我们与美国国立卫生研究院 (NIH)的合作研究构建了包含17个免疫细胞因子的预测模型预测肿瘤复发。本 课题组在此基础上采用微流体低密度表达芯片技术(qRT-PCR)，应用生物信息学 机器学习方法对以上预测模型优化后发现癌旁IL一2、IL-15基因表达可以作为早 期肝癌术后预后的独立预测因子。以上是基于基因转录水平的研究，然而Thl／Th2 类细胞因子蛋白是否可以作为肝癌的临床预测指标尚不十分肯定。本课题组前期 基于较小样本量的初步研究发现在蛋白水平IL-2和IL一15也与肝癌的复发相关。 基于其他恶性肿瘤的研究也提示Thl型细胞因子可以减少肿瘤的转移复发，而Th2 细胞因子表达增高则可增加术后复发率。特别是IL-IO在许多恶性肿瘤中被认为 是预后不良的分子标签。 基于肿瘤微环境的研究成果令人振奋，但是肝癌的转移复发除与微环境免疫 状态密切相关外，更与肝癌细胞自身的转移特性密切相关。我们的前期研究发现 调控肝癌转移潜能的基因改变在其原发瘤阶段即已存在，此为转移理论的重要进 桥蛋白是一种分泌型的非胶原化富含唾液酸的磷酸化糖蛋白，OPN正常情况下参 与体内许多生理过程。许多文献报道OPN表达增高与恶性肿瘤演进、侵袭转移密 切相关。为此，本研究中我们在前期研究的基础上首先通过ELISA方法在一组包 Y与肝癌复发相关，IL一2是最佳的预测预后的因子，并进一步扩大样本量通过高 通量的组织芯片技术加以验证。同时利用组织芯片检测肝癌组织中OPN的水平， 分析其与免疫相关因子联合应用在预测肝癌预后中的作用。 5 博士论文 中文摘要 第一部分 癌旁免疫炎症相关因子表达水平预测肝癌复发的研究 本研究拟从蛋白水平检测癌旁非癌肝组织中免疫相关因子的表达，研究其与 肝癌复发的关系。 immunosorbent 我们利用酶联免疫吸附反应(enzyme-iinkedassays ELISAs)定量检测192例(cohortA训练组n=128，测试组n=64)肝癌患者癌 旁肝组织中12个Thl／Th2相关细胞因子。同时用组织芯片免疫组化技术在包含 261例患者的独立阵列中(cohortB)进行验证，评价癌旁微环境中免疫相关细 胞因子的表达，在组织中的分布情况及其与术后肿瘤复发之间的关系。 结果发现，无复发组肝癌患者中，癌旁肝组织中IL一2，IL一15和IFN—Y蛋 白表达显著高于复发组。Cox逐步回归分析发现，仅有IL-2是效果最佳的独立 for for 预测因子(HR recurrence=O．4。P=O．001：HRdeath=O．5，P=-O．019)。 for 这一结果在队列A的测试组及队列B(HR for 肝组织中IL-2主要存在于肝细胞内，而非淋巴细胞。 癌旁肝组织中的IL一2，IL-15和IF