14122405荧光定量PCR分析报告.pdf

荧光定量PCR技术 荧光定量PCR技术 福建师范大学 王冰梅 内 容 提 要 内 容 提 要 1 概述 概述 2 实验操作 实验操作 3 数据处理 数据处理 4 仪器硬件和软件 仪器硬件和软件 技术应用 5 技术应用 1、概述 基本概念 基本概念 定量PCR的化学原理 定量PCR的化学原理 定量PCR的数学原理 定量PCR的数学原理 等位基因鉴定原理 等位基因鉴定原理 • 荧光定量PCR/实时定量PCR （Real-Time PCR, Q-PCR）： 在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧 光信号积累实时监测整个PCR进程，对未 知模板进行定量分析的方法。 荧光定量PCR与常规PCR的区 • 常规PCR技术 ： 对PCR扩增反应的终产物进行定性及定量分析 • 荧光定量PCR技术 ： 对PCR扩增反应中每一个循环的产物进行定量分析 荧光定量PCR的特点 • 特异性强 • 灵敏度高 • 可直接对产物进行定量 • 可解决PCR污染问题 • 自动化程度高、操作简单 初始DNA量越多, 荧光达到阈值时所 需要的循环数(Ct值)越少 SYBR Green I 结合到双链DNA 的小沟部位 只有和双链DNA结 合后才发荧光 SYBR Green I 工作原理 TaqMan Probes 荧光素 荧光素 FAM FAM 淬灭剂 淬灭剂 TET TET TAMRA TAMRA JOE JOE DABCYL DABCYL HEX HEX 与目标序列互补 与目标序列互补 VIC VIC TaqMan Probes工作原理 荧光基团 荧光基团 淬灭剂 淬灭剂 游离的探针 光 光 能量转移 另一波长的荧光 Taq 探针与目标序列配对时 发生 FRET ， 光 发出荧光 延伸时，Taq酶水解探针，使报告荧光基 Taq 团和淬灭荧光基团分离而发出荧光，形成