鸡白介素的进展解析.pptVIP

技术研发工作汇报 报告主要内容 　白细胞介素( Interleukin , IL) 简称白介素,是由白细胞产生的、介导细胞间相互作用的细胞因子,在细胞的活化、增殖和分化中起调节作用,是20 世纪80 年代后才发现的一类细胞因子。IL 与其他免疫系统,通过作用于T 细胞、B 细胞及自然杀伤细胞(N K) 等多种靶细胞来传递免疫信息,激活、调控血细胞的生长发育与分化成熟,参与机体的免疫应答,参与某些疾病的病理过程。由于白介素具有广泛的生物学功能，且用量极小就可以起到重要的介导效应，因此，目前有多种经基因工程生产的白介素已经或将要用于临床。 1.1 白介素的种类与生物学功能 天津生机集团股份有限公司 白介素是一类低相对分子质量的蛋白多肽，白介素家族的大多数成员在氨基酸序列、结构、理化特性和生物学功能等方面均不相同。 人的白介素研究在近十几年来发展很快,现在已广泛应用于疾病的治疗和疫苗的免疫增强剂,但动物的白介素研究相对滞后,鸡的白介素发展更加缓慢,但随着分子生物学等相关学科的发展,有关鸡白细胞基因与功能的研究已逐渐成为热点,现在已经克隆出的白介素有IL-1 、IL-2 、IL-6 、IL-12 、IL-15 、IL-16 、IL-17 及IL-18 等。 本文就目前鸡白介素（IL-2）分子生物学与应用的研究进展做一综述。 　IL-2: 白细胞介素-2（Interleukins-2，IL-2）是一类由活化的T 细胞分泌产生的糖蛋白，具有抗感染、抗病毒等功效，能够有效提高动物机体的免疫功能。1976年Morgan 等以T 细胞生长因子命名，在1979 年5 月正式命名为白细胞介素-2。医学上已经用于预防和治疗一些常规方法难以治疗的疾病如癌症、艾滋病等。对于家禽类，IL-2 主要作为免疫佐剂配合疫苗使用，以提高疫苗的免疫效果，降低副反应，同时还具有免疫增强、免疫治疗等功能。由于IL-2 是天然的细胞因子，不会造成体内的残留问题，对动物产品安全生产等方面具有广阔的应用前景。 人类IL-2 基因于1983 年被成功克隆后,30 多个物种的IL-2 基因被相继发现,鸡IL-2 直到1997 年才被Sundick R S 等克隆出来。鸡IL-2 是鸡的白介素中研究最为深入的。LillehojJ W 等发现鸡IL-2 真核表达质粒可增强艾美耳球虫基因免疫的效果,抑制球虫的复制。姜永厚等将含鸡IL-2 基因的真核表达质粒作为佐剂与NDF基因疫苗混合免疫接种雏鸡,用标准强毒攻击,结果发现,添加IL-2 质粒试验组免疫保护率明显高于单独接种NDF 基因疫苗试验组。 Lowent hal J W 等研究发现雏鸡注射鸡IL-2 等细胞因子能增加Ig A 抗体的分泌水平和对疾病的抵抗力。于链等研究了IL-2 质粒对传染性法氏囊病病毒的免疫增强作用。 Sundick等（1997）用ConA刺激鸡脾淋巴细胞构建了一个cDNA 文库，转染COS-7细胞，通过瞬时表达，首次克隆出了鸡的IL-2基因。所克隆的鸡IL-2ｍ mRNA 全长747 bp，结构基因长343 bp，根据氨基酸序列所推测的蛋白质长143个氨基酸。通过序列分析，该基因mRNA具有短的５′端非翻译区（ＵＴＲ），且该mRNA 仅在激活的Ｔ细胞中表达。根据核苷酸序列所推导的蛋白质含有一个短的信号序列，长22个氨基酸，该基因所编码的蛋白质含有４个保守的半胱氨酸，可形成２个链内二硫键，而哺乳动物只含有２个半胱氨酸，形成１个链内二硫键。 研究还发现，该基因靠近开放阅读框架的３′端有重复的ＡＴＴＴＡ 序列。Ｋａｉｓｓｅｒ 等（１９９９）采用ＲＡＣＥ技术获得了鸡IL-2基因全序列，对其基因组结构进行分析，发现该基因外含子和内含子结构与哺乳动物的极为相似，但前者的外含子２及内含子２和３更短一些。在该基因外含子４的３′端未翻译区有５个重复的“不稳定”ＡＴＴＴＡ的重复序列。该基因是一个既无结构（氨基酸）又无启动子序列多态性的单拷贝基因，在该基因的启动子上发现有许多潜在的调节序列，序列比较还表明该基因上存在其他潜在的转录因子结合位点，这在哺乳动物IL-2启动子上至今未见报道，并在研究鸡IL-2基因结构的过程中，意外地发现了１个Ｔａｑ多态现象，这可将该基因定位于鸡第４号染色体上与ＡＮＸ５相连，根据核苷酸序列所推导的氨基酸序列分析表明，该蛋白质结构是保守的，但是其受体结合位点并不保守. 李祥瑞（1995）利用ＳＰＦ鸡脾脏Ｔ细胞，体外诱生IL-2，提取诱导过的脾单核细胞总ｍＲＮＡ，反转录合成ｃＤＮＡ，将核酸片段与质粒载体连接，质粒转化宿主菌ＤＨ１０Ｂ，建立ｃＤＮＡ 文库。经过两轮筛选，成功克隆了鸡IL-2，经序列分析表明，鸡IL-2与人和其他哺乳动物IL-2ｃＤＮＡ同源性在５０％左右。 李建荣等（2001）则是采用ＣｏｎＡ刺