禽白血病病毒B、E和J亚群基因芯片检测方法建立.pdf

IHI{illNllllmlllHfllltllBllllllI 摘要 Y2143893 近年来鸡淋巴白血病(AL)一直危害着我国的养鸡业，已成为影响我国蛋鸡业 的第一大疫病。由于常规实验室检测方法费时费力，进口ELISA试剂盒价格高昂且 准确率并不理想，所以急需一种快速、灵敏、准确、高通量的检测方法来预防和控制 亚群的基因芯片分型和检测方法。 因突变区，两端选取其保守区域，设计合成三个亚群的通用上游引物1条，以及B、 E亚群的通用下游引物和J亚群下游引物各l条，将上述引物用Cy3标记，建立多重 PCR体系；参考目的序列内部的三个亚群各自的保守区域，选择亚群之间基因突变 位点多的区域，设计5条寡核苷酸探针，合成过程中在每条探针的5’端先加入若干 个碱基T’使探针长度达到35ma左右，再进行氨基化修饰，将合成好的探针点制在醛 基化玻璃基片上，制作寡核苷酸探针基因检测芯片；以寄主细胞DFol中提取传代ALV Cv3标记的PCR扩增产物，与基因芯片进行杂交反应，扫描结果。对基因芯片进行 特异性、灵敏度实验，并对50份临床样品进行检测。 经杂