4种常见根结线虫基因组DNARAPD分析.pdfVIP

维普资讯 植 物 病 理 学 报 ACTA PHYTOPATHOLOGICA SINICA ；、一『弓6 斗；2 4种常见根结线虫基因组DNA的RAPD分析’ 盒垒直 王 扬 胡先奇 越 塑：V (云南农业大学，云南省植物病理重点实验室，昆明 650201) 提要 用120个随机 引物对 4种常见根结线虫 l0个小种和类型进行丁全基 因组随机扩增DNA多态 性 (RAPD)分析，筛选出的11个适宜引物共扩增出 91条 RAPD谱带 ，86条是多态性谱带，占总谱带 的94．5 ；OPL12、OPK01对4种根结线虫种及其小种扩增的谱型有明显的特异性 聚类分析显示在 种间水平上4种根结线虫中花生根结线虫和爪哇根结钱虫亲缘关系最近，遗传距离为 0．532，北方根 结线虫与另外3种根结载虫的亲缘关系最远 ，平均遗传距离为 0．786；种下水平上同种根结线虫的不 同小种和类型闻存在不同程度的遗传差异，南方根结线虫 4个生理小种 间，花生根结拽虫 2个生理小 种间亲缘关系较近，爪哇根结线虫2个酯酶谱带类型间，北方根结线虫 2个细胞生物学小种间遗传差 异较大。在RAPD技术的基础上探索根结线虫分类鉴定的分子方法有着 良好的前景 关键词：根结线粤垦垒旦塞鲞坌堑 基因短口 1990年Williams等[1一和Welsh等口几乎同时建立了随机扩增多态性 DNA(RAPD)的分子 生物学技术．由于其具有简单、灵敏、快速、方便等特点，已在遗传图谱构建、基因定位、种群遗传 学及生物多样性等方面0 ]，得到了广泛 的应用。 目前根结线虫鉴定主要依据形态学、鉴别寄主反应、生物化学和细胞遗传学等方法。但这些 鉴定方法存在各 自的局限性且不能完全或真实地反映遗传本质。因此，基于DNA差异本质的鉴 定方法 已越来越引起人们的重视 。近年来 ，随着技术水平的提高，分子鉴定已应用于根结线虫的 分类鉴定中并已取得了很大的进展 Powers等对根结线虫的mtDNA进行了RFLP分析，将 4 种常见的根结线虫区分开 ]。Harris等根据 incognitarace2的mtDNA的一个1．8Kb的限制 性酶切片段设计了一对引物用于4种常见根结线虫的鉴定，将扩增产物用HinfI酶切后可区分 3种根结线虫，但M．hapta和M．javanica不能分开 ]。Powers等对线粒体基因内的编码序列 CO Ⅱ和lrRNA 间的非编码区段进行扩增能区分M．arenaria和M．hapta，但M incognitn和 肘． javanica区分不开 。经HiM I酶切后 ， ．如vanica和 incognita也能区别开口]。Zijlstra对核 糖体基因的ITS区段进行了RFLP分析 ，将来自寒冷地区的2种根结线虫M．hap1和M．chit— wood区别开_8]。Curran等用DNA指纹图谱的方法不仅将 4种常见的根结线虫区分开来，甚至 能将其它方法很难区分开的生理小种区分开。。]，目前这是用于根结线虫的分子鉴定方法中最成 功的方法。但该法技术要求高，花费昂贵。Cenis等应用RAPD技术区分开了除南方根结线虫4 个生理小种外的所有 4种根结线虫的种及小种 。 Triantaphylou等对 4种常见根结线虫进行了细胞遗传学的研究，发现南方根结线虫，花生 + 收穑 日期：1098—04—14 * * 国家自然科学基盘、云南省自然科学基金项 目煦云南省烟草公司 “九五 科技重点资助项 目(96A14)的部分 内容 … 理工作单位 ：福建省烟草科学研究所，福建三明 365001 维普资讯 植 物 病 理 学 报 28卷 根结线虫和爪哇根结线虫有着共 同稳定的单性生殖方式(有丝分裂)。在这一组内，爪哇根结线虫 和花生根结线虫在减数分裂时有着一致的染色体数 目和配置，而南方根结线虫却有许多独特的 细胞学特征 。例如在卵成熟过