东方山羊豆盐诱导抑制差减杂交文库构建及其表达序列标签分析.pdfVIP

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2016-05-10 发布于安徽
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东方山羊豆盐诱导抑制差减杂交文库构建及其表达序列标签分析.pdf

植物遗传资源学报2010，11(6)：777-783 ofPlantGeneticResources Journal 东方山羊豆盐诱导抑制差减杂交文库构建及其表达序列标签分析宋清晓1，王学敏1，高洪文，DzyubenkoNikolay2，ChapurinVladimir2，韩永增1，杨冬梅1，李玉坤1 (1中国农业科学院北京畜牧兽医研究所，北京100193；2俄罗斯瓦维洛夫全俄植物栽培研究所．圣彼得堡190000) mmoL／L 摘要：为筛选东方山羊豆盐诱导差异性基因，以250 NaCI处理的东方山羊豆eDNA为实验组，未经诱导刺激的为驱动组。利用抑制性消减杂交技术(SSH)构建消减文库并对其部分阳性克隆进行了ESTs序列分析。该消减文库克隆的重组功能预测及分类，得到大量参与信号转导、转录调控、渗透和代谢调节、机体防御以及光作用等过程的相关基因。随机选择非重复的4个差异表达的序列设计引物，以半定量PCR方法验证其消减效率，结果显示，诱导组的表达量显著高于非诱导组，表明该文库有较高质量，且所采用的技术手段有助于快速发现东方山羊豆新功能基因。关键词：东方山羊豆；盐诱导；抑制消减杂交；ESTs；RT—PCR ConstructionofcDNASSH InducedSaltTreatedand library by Analysis of in orientalis ExpressedSequenceTagsGalega SONG Xue—minl，GAO Vladimir2， Qing—xiao‘，WANG Hong．wenl，DzyubenkoNikolay2，Chapurin HAN Yu．kunl Yong—zen91，YANGDong．meil，LI InstituteAnimal (1 of Science，ChineseAcademyofAgricultureSciences，Beijing100193； 2 N．1．VavilovA11．RussianResearchInstitutePlant of Industry．St．Petersburg190000．Russia) cDNA wasconstructed subtractive cDNA Abstract：Subtractive library bysuppression from treated mmoL／L NaCI．The contained92％recom- G口匆弘orientaliswith(tester)orwithout(driver)250library binants sizes from0．2to1 withinsert kb．Fivehundred cloneswere andana— ranging positive randomlysequenced of 258cleanESTswere theaid cluste