斑马鱼神经管发育缺陷突变体的筛选和表征分析研究.pdfVIP

摘要 摘 要 脊椎动物胚胎发育过程中，神经胚形成(Neurulation)是一个重要发育时期， 此时期发育的标志事件是神经管的形成，其顺利地形成、闭合是神经系统正常 Tube 发育的关键。神经管发育缺陷(NeuralDefects，NTDs)是由于在胎儿胚胎发 育时期受遗传、环境影响或二者共同作用而致神经管形成、闭合障碍或闭合不 全的一类先天的神经系统发育缺陷，如无脑畸形、脑膨出、颅脊柱裂、脑脊髓 膜膨出等，是仅次于先天性心脏病导致新生儿死亡的第二大类疾病。本研究以 斑马鱼为动物模型，经ENU饱和诱变以及大规模突变体的筛选，获得一株具有 NTDs特征的神经管发育缺陷的突变体ntd。ntd突变是符合孟德尔遗传定律的 单基因隐性遗传突变，其纯合个体在神经发育时期显示出明显的神经管发育缺 陷，并伴随异常细胞凋亡、体轴变短、器官发育异常。吖啶橙染色检测显示ntd 纯合个体神经管部位发生严重的细胞凋亡，而经HE染色定位发现其神经管发育 过程中不能正常的空洞化，细胞呈无序排列。为研究揭示ntd突变发生的分子机 等，通过实时定量PCR技术和整体原位杂交技术研究了其表达模式的变化。并 进行了重点研究。此外，我们检测了神经系统发育特化的标志基因如krox，hgg， 变化。结果显示，ntd突变导致了多个信号通路分子的表达异常，而且其神经组 织特化和不对称发育过程亦显示不同程度的异常，推测其发育缺陷可能是由多 种信号共同作用导致。若从根本上揭示其突变机制，最直接的方法是通过定位 克隆技术克隆得到突变基因，并对其功能进行研究。总之，研究ntd突变体及其 突变调控机制将有助于揭示神经系统发育调控的根本机制，建立完善的NTDs 动物模型，为人类NTDs以及相关神经系统疾病治疗提供新的靶点。 关键词：神经管发育缺陷；斑马鱼；ENU诱变；突变筛选；神经发育：定位克隆 Abstract Abstract the of isan this Duringdevelopmentvertcbrate，ncurulationimportantprocess．In andclosureofneuraltubearecrucialfornormal formation period，the development of也enervous tube severe system．Neuraldefects(NTDs)arecongenital hereditationor／andenvironmentinthe of malformationscaused by development human ofclosureofneuraltuberesultsin cmbryogenesis．Failure anencephalia, rank second bifida,ctc．NTDsonly encephalocele，meningomyelocele，cranialspina neonatal．Inthis used to heartdisease thedeathof research，we congenital