人鼻咽癌中癌干细胞的形态和组化特性及其临床意义.pdf

人鼻咽癌中癌干细胞的形态和组化特性及 其临床意义 博士研究生：罗伟仁 指导老师：姚开泰教授院士 摘要 背景与目的 鼻咽癌(Nec)是一种具有鲜明的地域和种族性分布的头颈部肿瘤，具有独特 的生物学特性：大多数为未分化型非角化性癌，早期转移至颈部淋巴结。更重 要的是，患者放化疗后容易出现复发和远处转移，这往往是导致患者死亡的主 要原因。80年代初期，姚开泰就首次提出鼻咽癌发病的“三次打击”假说，即EB 病毒(EBV)、化学致癌物和胚性击中(即遗传因素或自发／诱发突变)构成NPC的 主要病因。近年来，学者们对鼻咽癌发生发展的分子机制亦作了大量的研究。 然而，鼻咽癌恶性侵袭和转移的分子机制十分复杂。如何能早期对鼻咽癌患者 的侵袭和转移潜能进行准确评估，从而指导临床进行及时、有效的治疗，提高 鼻咽癌患者的生存率、改善其预后，这是广大医疗和科研工作者当务之急。 癌干细胞(CSCs)目前是肿瘤研究中的热点之一。CSCs理论认为肿瘤组织内 有一小群细胞具有与干细胞类似的特性，即具有自我更新和多向分化的生物学 特性，是恶性肿瘤患者出现局部复发和远处转移以及放化疗耐受的根源所在。 近年来，学者们已通过表面分子标志物筛选成功分离和鉴定乳腺癌、结肠癌和 肺癌等多种实体恶性肿瘤。2007年，姚开泰等最先提出和证实了鼻咽癌组织中 存在CSCs细胞。最近，我们首次证实ALDHI(乙醛脱氢酶1)可作为分离和鉴定鼻 咽癌CSCs的一种可靠的分子标记物。有兴趣的是，愈来愈多的研究表明， 摘要 CSCs“干性”与EMT(上皮细胞．间充质细胞转化)的发生有着密切的联系。广为人 知，EMT在恶性肿瘤的扩散和转移中起着重要的作用，其促使肿瘤细胞更容易 从原发灶脱离，从而往周边间质进行侵袭和扩散。在鼻咽癌组织病检切片中， 我们观察到，侵袭边缘或者浸润周边组织中的肿瘤细胞常常呈梭形间充质细胞 形态。我们前期研究发现，这些梭形细胞中ALDHl的表达水平明显上调，提示 其具有CSCs“干性”特性。早在1960年，我国著名的病理学家梁伯强就发现，这 些具有高度侵袭能力的梭形细胞容易侵犯患者的颅底神经。然而，有关这种梭 形癌细胞的恶性生物学行为以及相关分子特征，至今为止，人们知之甚少。 因此，本课题的主要研究目的是：①检测这些梭形癌细胞与EMT发生之间 的关系；②检测EMT相关蛋白在鼻咽癌组织中的表达情况，分析其表达与鼻咽 癌的侵袭性生物学行为的关系，评估其对患者预后的影响；③进一步，我们拟 通过表达谱芯片实验筛选出鼻咽癌组织中EMT相关基因，为深入了解鼻咽癌侵 袭和转移恶性进程中的具体分子机制及其生物学功能奠定坚实的实验基础。 方法 第一部分鼻咽癌组织中梭形癌细胞具有EMT和CSCs特性： 1．通过免疫组化方法在115例鼻咽癌组织梭形癌细胞和47例鳞状癌细胞中 形癌细胞的比例与鼻咽癌恶性生物学行为及预后的关系。 2．通过免疫组化和组织荧光方法检测肿瘤出芽和ALDHl在105例鼻咽癌 组织中的表达情况。 第二部分EMT和CSCs相关蛋白在鼻咽癌组织的表达及临床意义。 1．构建包含122例鼻咽癌组织和29例慢性鼻咽炎组织在内的组织芯片 ㈣)； Ⅱ 博士学位论文 蛋白在122例鼻咽癌的表达情况，分析它们的表达与临床病理特征和患者预后 之间的联系：组织免疫荧光确证某些EMT或CSCs相关蛋白的定位表达。 3．上述EMT和CSCs相关标志物蛋白在122例鼻咽癌组织中进行聚类分析。 第三部分基因表达谱高通量筛选鼻咽癌组织中EMT相关基因： 1．筛选出25例鼻咽癌活检组织及8例鼻咽正常上皮组织作为芯片实验对象， HumanGenome 采用北京博奥22K Array人表达谱基因芯片进行芯片检测； 2．SAM软件分析差异表达基因，qRT．PCR进行鉴定。在此基础上，通过在 线网站进行文献挖掘，筛选出鼻咽癌中与EMT相关基因，并对其进行GO功能分 析、KEGG通路和层次聚类等分析。 结果 第一部分 鼻咽癌组织中梭形癌细胞具有E