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蟋蚌神经肚基因Grb—ast8串联体的构建与表达
中文摘要
bimaculatus)脑中分离的一种咽侧体静体激素，体
(Grb-ASTI是从蟋蟀(Gryllus
外实验显示它强烈抑制昆虫咽侧体合成保幼激素，半衰期显著地比其它Grb—AST
论文采用三种方法构建Grb．ast8串联体，并将构建后的串联体导入大肠杆菌进行
表达分析。
3对引物。这3对引物分别采用不同的方法进行串联体的构建。第一对引物利用
Klenow
DNA聚合酶和T4
DNA连接酶进行随机串联：第二对引物使用￡coli
DNA聚合酶I和￡coli
DNA连接酶，采用缺口补平法进行拼接；第三对引物通
过高保真DNA聚合酶(Pvrobest“DNA
法进行构建，从中克隆到～个含有8个Grb—ast8的串联体。
架正确后，将重组子导入表达宿主菌￡coli
BL21进行表达分析。(通过菌液浓度
(OD600=0．4．O．8)和诱导剂浓度(O．1mM，O．5
mM，1．0mM)梯度筛选，得到一个
最优诱导浓度组合。表达产物经SDS．PAGE可见重组质粒受体菌比空白质粒受体
菌多表达了一种蛋白质，且这个蛋白质的分子量与理论推导值13．86KD一致。
生物活性测试结果表明，GI‘6一ast8串联体表达产物对菜粉蝶幼虫(Pieris
rapae)
具有一定的毒害作用。o
关键词：蟋蟀；神经肽jAS’kG，6。aS馏C串联体j表欺
中国热带收业科学院华南热带农业大学二OO二届硕士研究生毕业论义
ABSTRACT
a Allatostatin wasisolated
Grb—ASTlis memberofinsect neuropeptidesfamily．It
Grb-ASTl
vitro show
fromthebrainof bimaculatus．In
Gryllus bioassay greatly
JH(Juvenile insect
by CA(corporaallata)Even
inhibiting Hormone)biosynthesis
is The
withotherGrb—ASTs．thehalflifeofGrb—ASTl amino
more．comparing longer
cDNA
acid of is nineresidues．The
Orb·ASTl
sequence N—AQHQYSFGL，totally
nucleicacid of
Grb—AST encodesfifteenASTs．The
encoding precur
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