猪瘟病毒编码E2糖蛋白基因的克隆与鉴定.pdf

一、 摘要 染色法、兔体交叉免疫试验、酶联免疫吸附试验及病毒的分离方法对地方猪瘟内 江毒株进行了全面的病毒鉴定，确定其为猪瘟病毒。同时，探索该病毒在犊牛睾 n大肠杆菌体中， 双酶切后，T4DNA连接酶连接扩增产物，成功地转化到DH5 质粒、扩增产物，其结果均为阳性。f该克隆片段经序列分析比较该序列基因与 门株和兔化弱毒株相同基因的比较其同源性分别为53％和48％。产一一～ 关键词：猪瘟病毒E2基因克隆序列分析 二、 前言 2．1 选题背景和依据： 猪瘟(Swine Cholera，HC)，为了和“非 Fever，SF)又名猪霍乱(Hog 洲猪瘟”相区别(其表现为出血、水肿病变，类似急性猪瘟，由DNA病毒引起)， Swine 故欧洲统称猪瘟为古典猪瘟(ClassicalFever，CSF)，我国也有人叫烂肠 瘟。猪瘟首先于1883年在美国俄亥俄洲发现，是猪的一种高度传染性的疾病， 其特征是：急性经过、高热稽留、死亡率很高和小血管壁变性引起的出血、梗死 和坏死等变化，由于其流行面广、危害大，1895年世界兽医大会(WVA)把猪 瘟作为议题之一。1886年Salmon等，对症状类似的猪瘟和沙门氏杆菌病及猪丹 仅感染猪属动物：猪、野猪。在实验条件下，该病毒还可以感染牛和羊并引起羊 的繁殖障碍[1310猪瘟病毒(简称：SFV或HCV)，曾分类属披盖病毒科，瘟疫 病毒属[161但在1984年，国际病毒命名和分类委员会根据披膜病毒科的黄病毒 属成员在病毒粒子结构、增殖特性和基因序列等都不同于其他披膜病毒而将其独 立出来，成为新科即黄病毒科，1991年，国际病毒命名和分类委员会又根据披膜 病毒科中瘟疫病毒属的基因组结构类似黄病毒而将瘟疫病毒属归入黄病毒科“’。 与猪瘟抗原相关的同属病毒有：牛病毒性腹泻病毒(BVDV)和绵羊的边界病毒 (BDV)，但与黄病毒科其他病毒属的病毒成员没有交叉关系“’。1976年 J．M．Aynaud指出隐性猪瘟愈来愈多[221。猪瘟是造成养猪业巨大经济损失的主要 疾病之一，其严重危害养猪业。世界各国由于本病的流行，每年都会造成生猪的 大量死亡。目前，典型猪瘟诊断比较容易，而非典型猪瘟诊断很却困难，而这种 非典型猪瘟的存在又直接影响到该病的消灭。 2．2、病毒的基本特性： 科。但目前研究显示瘟病毒和黄病毒问也存在着一些根本上的差异，如：病毒粒 子组成，结构，核苷酸与氨基酸序列的同源性，瘟病毒开放阅读框架第一个蛋白 的酶的活性以及病毒编码RNA依赖的RNA聚合酶活性等，从而有理由将其单独 成一新科：瘟病毒科(Pestivirdae)[8,9,101。 (2)HCV为单股、正链RNA病毒，外表有脂双层的囊膜，完整的病毒颗粒 呈球形，直径为40—60nm，核衣壳呈二十面体对称””，直径为29nm，囊膜伸 展出许多长6～8nm的含糖蛋白大的纤突结构“1,221。 (3)病毒的浮密度由于梯度介质和培养基不同，其为112～1．179／ml不等， 在氯化铯中的浮密度为1．259／ml∽”，也有人认为是1 169／ml‘81。沉降系数为 S20=140～180s，分子量为4×106Da，碱基长约12．3Kb。 中(如中和试验，补体结合反应，免疫荧光试验)具有免疫交叉反应，而且人工 感染的BVDV的猪对以后HCV的攻击出现回忆性免疫反应，甚至产生免疫交叉 保护。一般情况下，同源病毒感染产生的中和抗体滴度明显高于异源病毒感染产 生的抗体滴度。由此，根据血清中BVDV和HCV中和抗体滴度的高低，可以区 别这两种病毒之间的感染‘141 J。 区别HCV和BVDV病毒‘15 56 (5)感染性：具有单股RNA的HCV才具有感染性，细胞培养液中的HCV 分钟或68℃30分钟，其不丧失感染性，在PH5—10之间，病毒的毒力很稳定， 超