猪源大肠杆菌16S rRNA甲基化酶介导的氨基糖苷类耐药机制研究.pdf

阳性菌有46株获得了接合子，接合频率从1o-6到lo-不等。提取，tB阳性菌株及 其接合子的质粒，用地高辛标记，tB探针进行Southern杂交，结果证实rmtB基因位 于分子量大于54kb的接合性大质粒上，rmtB基因在广州和重庆两猪场大肠杆菌中以 水平传播为主。 3.丹侧忍基因环境的初步分析 用针对人源rmtB基因及其上下游序列的特异性引物进行PCR扩增，对扩增的目 的片段进行序列测定和比较分析，确定，tB的基因环境序列。结果显示rmlB基因的 上游是TO转座子3端的部分序列，下游是肠炎沙门氏菌基因岛SGII上融合蛋白 GroEL/Intll的编码基因groEUintll的部分序列.表明动物源rmtB基因与人源rmtB 基因的传播环境相似，都与可动遗传基元转座子有关。 4.rnd.阳性菌及其接合子的I类整合子研究 采用PCR、限制性片段长度多态性分析 (RFLP)和测序方法检测，tB阳性菌及 接合子携带的I类整合子。结果:49株rmtB阳性菌均检测到I类整合酶基因，59% 的菌株携带基因盒;46株接合子中有38株(82.5%)检测到I类整合酶基因，22株(43%) 携带基因盒;整合子以整合甲氧节吮、大观霉素、链霉素的耐药基因盒为主。研究结 果表明I类整合子在rmtB阳性菌中比较流行，而且能随着，tB基因进行水平传播. 5.八川忍阳性菌及其接合子氨基糖昔钝化酶基因的研究 采用PCR.RFLP和测序分析等方法检测rmlB阳性菌及接合子携带的氨基糖昔 类钝化酶基因。结果:49株rmtB阳性菌中检测到7种氨基糖昔类钝化酶基因，检出 率从高到低依次是aac(3)一(93.5%),aph(3)-VII(77.6%),aph(3，一(75.5%),aadAI (34.5%),aac(6)-lb(14.3%),aac(3)-IV(10.2%)和aph(3)-IV(8.2%);46株接合子中 检测到四种氨基搪昔类钝化酶基因，即- (3)-11,aph(3)-VII,aph(3)一 和aadA1. 检出率分别是80.43%,76.1%,76.1%和4.3%;钝化酶基因多联合分布于，tB阳性 菌中，最常见的是aac(3)一 aph(3，一和aph(3)-VII三种基因的联合，占总分布的 36.7%。研究结果表明，氨基糖普类钝化酶基因广泛存在于，tB阳性菌中，并能与 rmtB基因一起进行接合传播，共同介导细菌对氨基糖昔类的耐药性。 关键词:氨基搪普类 16SrRNA甲基化酶 耐药机制 RmtB 质粒 16SrRNAMethylase-MediatedResistancetoAminoglycosidesin EscherichiacoliIsolatedfromPigFarms ChenLin ProvincinalKeyLaboratoryforVerterinaryPharmaceuticsDevelopmentand Evaluation,CollegeofVeterinaryMedicine,SouthChina人护culture University,Guangzhou510642,China) Abstract:16SrRNAmethylasesconferredhigh-levelresistancetoaminoglycosideshave beenidentifiedinclinicalisolatesofGram-negativebacteriarecently.Theproliferationand disseminationoftheseclinicalisolatesthatproduce16SrRNAmethylaseshavebeena great也neattotheuseofaminoglycosidesinclinicandhascausedagreatdealofconcern. Theresistancemechanismofaminoglycosidesmediated勿 16SrRNAmethylaseshave beenreportedinsomecountriesbutnotinChina.Aminoglycosidesarealsowidelyusedin food-produc吨 animalstopreventandcontrolbacterialinfectionsandfor