藻类的分离和培养.doc

藻类的分离和培养 　　微型藻类的分离和培养方法基本上与菌类的方法相似，但还需加上光照条件，并以液体培养为主。在大量培养时，可不必考虑无菌条件。 　　一、目的 　　学习藻类的分离和培养方法 　　二、药品、材料和用具 　　水生生物培养槽，玻璃片（面积稍大于培养槽），橡皮管，显微镜，三角烧瓶，试管，筛绢，棉塞，微吸管，凹玻片，灭菌锅，载玻片，吸管，培养皿，人工光源，木盆（或小型实验池），充二氧化碳气钢瓶，抽气泵，离心机。 　　土壤抽出液，青霉素，链霉素，琼脂，硝酸钙，磷酸二氢钾，磷酸氢二钾，过磷酸钙，硫酸镁，氯化钾，碳酸钠，三氯化铁，硅酸钠，葡萄糖，蛋白胨，硫酸铵，硝酸铵，氯化钙，碳酸氢钠，钼酸，氯化钠，柠檬酸铁，硫酸锰，人尿，海泥抽出液，食盐。 　　三、操作 　　生长在静水或水流缓慢河流中的藻类，培养比较容易。取到实验室后，要立刻从材料瓶中移到宽大的水生生物培养槽内。为了培养大的丝状藻，要利用宽的、不高的容器。这些容器要用玻片盖住，以防止培养物受灰尘沾污。倒入容器的水要达到容器高度的一半，或稍多些，使水面上还有充分空气。在容器边缘，要用一小块纵切橡皮管垫住，可使玻片不致紧贴容器，空气才能进入容器中。细微的藻类如团藻目、硅藻门能很好地生活于培养皿中。很多藻类如颤藻属、水绵属的若干种、轮藻属等可在实验室中保存很多年。 　　在迅速流动水中生长的藻如丝藻属、毛枝藻属等比较难于培养，因为它们要求经常输入氧气。在水层较高水中，在高容器中，这些藻类迅速地死亡。为了把这些藻类保存到实验时，应当把它们分成一些小部分，放在水层较薄的、宽的容器内，并须常常换水，把空气吹入水中。还可以用橡皮管把水生生物培养槽和水龙头连结起来，建立有流水的水生生物培养槽。 　　在水生生物培养槽中培养藻类时，应尽可能创造和保持藻类天然生存条件。把藻类培养在从采集藻类那一水域取来的水中，或其他天然水（尤其不能用自来水，因其中含很多氯气，必要的话，也须置较长时间，或加以煮开），或在水中加入混合养料，这些养料是由制造有机物质所必需的矿质盐构成。 　　在夏季，不要把藻类培养物放在直射太阳光下，而要放在凉爽的场所，例如向北窗台上。在秋、冬季节，如希望藻类保持积极生活活动状态，就要把培养物移到有人工光照处。 　　以上是一般藻类粗放的培养、保存方法。如要作较深入实验，需注意以下问题： 　　1 　　真正的“纯种培养”是指在排除包括细菌在内的一切生物的条件下进行的培养。这是进行科学研究不可缺少的技术，而在生产性培养中不排除细菌的称之为“单种培养”。 　　1）采样和预备培养：首先要采集有需要分离藻类的水样，采回后在显微镜下检查。如发现需要分离的藻类数量较多时，可立即分离。若数量很少，最好先进行预备培养，待其增多后，再分离。 　　1/4～1/2。如水样中藻类种类较多，就应使用几种不同的培养液，使藻类在适合于自己繁殖的培养液中繁殖起来。 　　1/4～1/3培养液。然后把经筛绢过滤除去大型浮游生物的水样接种进去，放在合适温度下或室内靠北窗口下培养。在培养附着藻类时，容器可静止不动；而培养浮游藻类时，应该每天摇动一次。 　　有的藻类在普通培养液中完全不能繁殖，有的繁殖非常困难。此时需改变培养液浓度，加入葡萄糖、蛋白胨等有机物，补充微量元素和辅助生长物质，加入土壤抽出液，就有可能获较好效果。 　　1cm土壤（采用腐殖化的农田和庭院土）。再加入水使达5cm，塞上棉塞，采用蒸气间隙灭菌，每天灭菌1小时，连续二天。由于气泡上升，棉塞可能弄脏。因此，最好先在水中煮一段时间，使气泡跑掉后，再加棉塞进行灭菌。 　　2）分离方法：常用下列四种。 　　15毫米）玻管，在火焰上加热，待快熔时，快速拉成口径极细的微吸管。将稀释适度藻液水样，置浅凹载玻片上，镜检。用微吸管挑选要分离的藻体，认真仔细地吸出，放入另一浅凹载片上，镜检这一滴水中是否达到纯分离的目的。如不成功，应反复几次，直至达到分离目的为止。然后移入经灭菌的培养液中培养，一般在每个培养皿中接20～30个个体。从分离出少量细胞扩大培养到200毫升的培养量，如硅藻一般需20天以上。为了较长时期保存藻种，可将分离到的藻种用青霉素（1000～5000单位或链霉素（20ppm）处理后，获得较纯藻种。 　　此法操作技术要求高，要细心。往往吸取一个细胞，要反复几次才能成功，且适于分离个体较大藻类。 　　22～4滴，间隔一定距离，作直线排列。如一滴水中只有几个所需同种藻类个体，无其他生物混杂，即用吸管吸取培养液，把这滴水冲入装有培养液并经灭菌试管或小三角瓶中去。如未成功，需反复重做，直到达到目的。 　　此法简便易行，尤其适宜于分离已在培养液中占优势种类。分离受少量生物污染培养液中的藻类多用此法。操作时同样要求细致、认真，使用工具及培养液经严格消毒。 　　3　　1/4容量培养液的试