堆肥未培养微生物宏基因组文库构建及新木聚糖酶基因克隆、鉴定和表达.pdfVIP

堆肥未培养微生物的宏基因组文库构建及新的木聚糖酶基 因的克隆、鉴定和表达 摘要 通过差速离心从自制堆肥样品中分离未培养微生物细胞，提取其 DNA)，末端平头化后，用柯斯质粒pWEB：：TNC 总DNA(metagenomic 为载体构建成了包含约5万个克隆的未培养微生物的宏基因组文库 (metagenomic 酶切分析，结果显示所有的质粒都含有插入片段，最大为45kb，最 kb kb，文库外源DNA总容量是1．8×106 小为25kb，平均大小为35 (1．8Gb)，14个质粒的酶切带型都不相同，说明文库克隆的DNA片 段随机性比较大。 筛选文库获得2个表达木聚糖酶活性的克隆，分别命名为 在的木聚糖酶基因umxynllA具一个771 bp的ORF(OpellReading Frame)，可编码含257个氨基酸的蛋白质，所编码产物与混