荷人卵巢癌裸鼠循环无细胞DNA的来源及和瘤负荷、凋亡的关系.pdf

中文摘要 荷人卵巢癌裸鼠循环无细胞DNA的来源及其与瘤负 荷、凋亡的关系 摘 要 cell—freeDNA． 目的：循环无细胞DNA(circulating cfDNA)是存在于体液中的碎裂的核酸片段。本实验利用人 卵巢癌细胞株SKOV3建立荷人卵巢癌裸鼠移植模型。采用 半定量PCR的方法，检测荷人卵巢癌裸鼠血清和腹水中无 细胞DNA的含量，并与肿瘤的重量、凋亡率进行对比，研 究人卵巢癌移植瘤裸鼠模型血清及腹水中cfDNA的血流动 力学改变，探讨cfDNA在卵巢上皮性癌临床诊断及病情监 测中的意义。通过检测荷瘤裸鼠经化疗前后血清cfDNA水 平的变化规律，并与细胞凋亡进行对比，从而为cfDNA是 否可作为无创性的卵巢癌患者病情监测及疗效观察的生物 学指标提供理论依据。 方法：将人卵巢癌细胞株SKOV3种植于6．8周龄雌性 裸鼠的皮下及腹腔中，观察裸鼠成瘤和肿瘤生长情况。分别 组)取皮下种植瘤模型血清及肿瘤，14天取腹水种植瘤模型 血清和腹水。皮下种植瘤模型化疗组在种植后第30天用顺 微量提取试剂盒提取血清及腹水中游离的DNA片段。我们 针对临床常用的诊断和监测指标血清CAl25蛋白的基因序 中文摘要 CAl25 2、3组和腹水组的血清及腹水组腹水中cfDNA的含量，并 与相应的肿瘤重量进行对比。用TUNNEL法检测荷瘤3组 及化疗1、2、3组组织细胞的原位凋亡，将其凋亡率与相应 的cfDNA含量进行相关性分析。试验结果采用SPSS13．0统 计软件进行独立样本t检验，单因素方差分析，和spearman 相关分析进行统计学处理。 结果： 1各组基因片段在人卵巢癌裸鼠移植瘤模型血清及腹水中 的表达情况 在人卵巢癌裸鼠移植瘤模型的血清及腹水中均能检测 5、ALU247以及 到人类特有的基因片段13-actin、ALUll 89bp 中的肿瘤相关cfDNA的含量没有显著性差异 cfDNA的含量与血清中的含量相比没有显著性差异 中文摘要 1)。 中的含量没有显著性差异(t-3．535，P0．05)。(Table 2各组人卵巢癌裸鼠移植瘤模型血清中cfDNA水平的变化 情况及其与瘤负荷的关系 分别于皮下种植SKOV3卵巢癌细胞株后14天(荷瘤1 结果发现血清中的CAl25．cfDNA的表达各组间有差异 血清中的肿瘤相关c∞NA的表达各组间有差异(F=52．253， 1)。 荷瘤3组高于荷瘤2组，差异有显著性(尸O．05)。(Table 101bp P0．05)。(Table3，Fi98，Fi99)。 3血清cfDNA在化疗前后的变化情况 cfDNA的值在化疗后第1天达最高水平，第3天有下降趋势， 4化疗前后血清cfDNA水平与肿瘤细胞凋亡的关系 101 细胞的凋亡率呈正相关(CAl25．cfDNA bp片段的 中文摘要 (Table2)。 结论： 1成瘤裸鼠血清及腹水中可以检测到人卵巢癌细胞株的人 类特异性cfDNA，其含量在化疗后先显著升高而后下降，并 源于肿瘤细胞，并与其凋亡和坏死有关。 2血清CAl25．cfDNA中101 bp