含VHb基因和GFMcryIA基因的双价基因植物高效表达载体的构建.pdfVIP

武汉植物学研究2007，25(2)：118～122 ／orana／ofWuhanBotanicalResearch 含 VHb基 因和 GFMcrylA基因的双价基因植物 高效表达载体的构建 王友如 ，”，崔洪志 ，郭三堆 (1．湖北师范学院生物系，湖北黄石 435002；2．中国农业科学院生物技术研究所基因工程实验室，北京 100081) 摘 要 ：将人工合成的、密码子优化后的透明颤菌血红蛋 白基因与人工合成的GFMcrylA基因构建成双价基因植物 高效表达载体PGBI4ASVHBBt，vgbM基因表达盒中含2个增强子的35S启动子、Q前导序列、Kozak序列、多联终止 密码子及 Nos终止子 ；Bt基因表达盒中，除含有以上提高转录和翻译的调控元件外 ，还包含有正确切割、加工序列、 Poly(A)信号序列。利用根癌农杆菌介导转化烟草，获得了转基因植株；PER及 Southemblot检测 ，证实了双价基 因在烟草基因组中的整合 ；Westernblot检测证实了vgbM基因在转基因烟草中的表达；杀虫实验表明GFMcrylA基 因也表达出活性毒蛋 白。 关键词 ：双价基因；表达载体；抗虫性；活性蛋 白 中图分类号 ：Q78 文献标识码：A 文章编号：1000·470X(2007)02—0118·05 ConstructionofPlantExpressionVectorHarbouringBivalentGenes ComposedofSyntheticvHbGeneandGFMcry／A Gene WANG You．Ru， ‘ CUIHong．Zhi．GUO San．Dui 。 (1．TheBiolosyDepartmentofHubeiNormalUniversity，Huangshi，Hubei430052，China； 2．TheGeneticEngineeringLaboratoryofBiotechnology s椰 Insttiuteo，ChineseAcademyofAgr／cu／turale／nce，Beijing 100081，China) Abstract：Thehighly·efficientplna texpression vectorharbouringbivalentgeneswasconstructedbyap· plyingtheartificiallym·odified·synhtesizedVHbgene(vgbM gene)nadhtemodifiedBtgene(GFMcrylA gene)，vgbMgeneexperessioncassettescontainedsuchcis—actingelementsas35Spromoter，twoenhnac． ers，Q nadKozaksequence，poly—terminatornadNosterminator，besideshteseelements，Btgeneexpres． sioncassettesconatinedsplicingseuqence，processingsequencenadPoly(A)seuqence．Transgenictobac· COplnatswel~obatinedhtroughhtetransfomrationwihtAgrobacterium tumefaienscarryinghteexpression vectorPGBI4ASVHBBt，byPCR amplificationnadSouhtem blotnaalysis，itwasprovedhtathtebivalent geneswereinsertedintohtetobaccoplna tgenome；htroughwesternblotna alysisitwasalsoverifiedhtat vgbM geneexpresesd in hte trna sgenicplna ts．Toxicityassay indicat