苏云金芽胞杆菌CTC的S-层蛋白和晶体蛋白共存关系及应用的研究.pdfVIP

苏云金芽胞杆菌CTC的S．层蛋白与晶体蛋白共存关系及其应用研究 捅姜 在苏云金芽胞杆菌CTC中检测到了S．层蛋白。通过蛋白质序列比对的方法发现 该菌的s．层蛋白可能参与形成晶体状内含体。进一步以免疫印迹、免疫荧光、免疫 电镜以及基因缺失的方法确证，该菌株的晶体蛋白CTC和100kDa的s．层蛋白是同 kDa左 种蛋白。研究还发现了另外一种S．层蛋白，crc2，该蛋白质大小可能在80 右，通过测序与基因序列比对发现该基因序列与S．层蛋白CTC的编码基因有很高的 相似程度。实验还对两个s．层蛋白表达和转录时相作了检测分析。 细菌的S．层蛋白是在细菌中分布极广的表层单分子层晶格网状包膜结构，其研 究已经受到普遍重视。但是，S．层蛋白的功能并未被完全了解。本研究以苏云金芽 胞杆菌C】rc菌株的S．层蛋白为研究对象，利用s．层蛋白双缺失菌株为材料，讨论 了其对细菌细胞形态、传代繁殖、耐碱性以及质粒转移的作用及生理功能。结果表 明，s．层蛋白缺失以后，细菌形态发生严重变化。液态培养下，细菌生长减缓，平 板培养时，相反增快．耐碱性实验表明s．层蛋白可能对产生适应碱性环境的个体有 特殊意义．此外，S．层蛋白对于质粒DNA的转化具有抵抗作用。 将来自于苏云金芽胞杆菌幕虫亚种CIC菌株的s．层蛋白基因ctc和ctc2同时缺 失，得到了S．层蛋白缺失菌株Tr5。为了在苏云金芽胞杆菌的表面展示和胞外表达 丝氨酸乙酰内酯酶以增强抗欧文氏胡萝1-软腐病的能力，将一个使苏云金芽胞杆菌 分泌到胞外和锚定至细胞壁的上游序列相融合。所构建的融合基因slh—aiL4在Tr5 白有较高的降解N．乙酰高丝氨酸环内酯AHL的能力，并且对蛋白酶和紫外照射有 很强的抗性。为了研究在不同苏云金芽胞杆菌中表面表达丝氨酸乙酰内酯酶的效果， 以来自苏云金芽胞杆菌的杀虫晶体蛋白1CP3A的强启动子高效表达的胞内丝氨酸乙 酰内酯酶AiiA4Q7作为对比，同时采用了9个苏云金芽胞杆菌工程菌株，它们分别 在Tr5和另外两个杀虫晶体的苏云金芽胞杆菌突变菌株BMBl71和4Q7中表达单一 Ⅱ 制欧文氏胡萝b软腐菌引起的软腐病。在相同实验条件下，9个菌中以Tr5作为受 体菌在胞外表达了丝氨酸乙酰内酯酶的重组菌效果最好。在进一步以野生型苏云金 芽胞杆菌作为对照时发现，工程菌抑制欧文氏胡萝h软腐病的效果有了较大的提高。 实验还对软腐病抗病机制作了一定的研究。我们的研究将为欧文氏胡萝b软腐菌引 起的植物软腐病生物控制提供一种可行的防治方法。 关键词 苏云金芽胞杆菌，S．层蛋白，CTC，功能，N．乙酰高丝氨酸环内酯， 融合蛋白 111 Abstract Asurface wasrevealed CTC．Protein layerprotein in且thuringiensisalignment showedthatthe formationofthe mightparticipate crystalline。like S-layerprotein inclusion．Furtherdetection byimmunnoprecipitation,immune kDainclusionCTC electron and defection 100 that,the protein microscopygene proved 100kDa werethesame surface andthe