沙雷氏菌(Serratiamarcescens)Yj1的分离鉴定及其菌体有机磷降解酶的分离纯化.pdfVIP

生物技术通报 ·研究报告· BIOTECHNOLOGY BULLETIN ( ) 2015, 31 7 :180-187 沙雷氏菌（Serratia marcescens ）Yj1 的分离鉴定及菌 体有机磷降解酶的分离纯化 于亭  王春红  张婷婷  汲添  武志海  杨美英 （吉林农业大学，长春 130118） 摘 要 ： 从大豆土壤中分离纯化得到一株具有卵磷脂和乐果降解能力的菌株Yj1，对该菌株进行鉴定、生长条件优化、酶活 性鉴定以及有机磷降解酶的分离纯化。结果表明，Yj1 与Serratia marcescens WW4（CP003959.1）的16S rDNA 相似度为99%。正交 试验对所需培养基进行优化，得到该菌株的最佳生长条件为甘露糖、蛋白胨和pH 8 的组合。Yj1 菌株在两种磷源条件下，菌株生 长量均很低，但72 h 内以大豆卵磷脂为磷源时的菌体生长情况优于乐果。以大豆卵磷脂为磷源时酸性磷酸酶、碱性磷酸酶与有机 磷降解酶活性明显高于以乐果为磷源时的酶活，且72 h 内碱性磷酸酶活性一直都高于酸性磷酸酶和有机磷降解酶。硫酸铵沉淀法 结合阳离子交换层析成功从Yj1 菌体中分离纯化了有机磷降解酶，SDS结果显示纯化的蛋白为单一条带。且阳离子交换层析 的提纯倍数是硫酸氨沉淀的5.303 倍，硫酸氨沉淀为粗酶的 1.416 倍。 关键词 ： 沙雷氏菌；Yj1 ；乐果；大豆卵磷脂；有机磷降解酶 DOI ：10.13560/ki.biotech.bull.1985.2015.07.027 ， Isolation and Identification of Serratia marcescens Yj1 and Separation and Purification of Organophosphate Degrading Enzymes Yu Ting Wang Chunhong Zhang Tingting Ji Tian Wu Zhihai Yang Meiying （Jilin Agricultural University ，Changchun 130118 ） Abstract: The strain Yj1 isolated and purified from the soybean soil could degrade soy lecithin and dimethoate. The 16S rDNA identification of the strain, optimization of growth conditions and examination of enzyme activities were performed and organophosphate degradation enzyme from Yj1 was separated and purified. The results revealed that the similarity of 16S rDNA in Yj1 and Serratia marcescens WW4（CP003959. 1）was 99%. The orthogonal experiment for the culture medium demonstrated that the optimal growth condition of Yj1 was the combination of mannose, pepton