高糖刺激下大鼠肾小球系膜细胞MMP-2，TIMP-2，MT1MMP和CTGF的表达及其意义.pdfVIP

Med J Chin PLA, Vol. 38, No. 10, October 1, 2013 　811 论　著 高糖刺激下大鼠肾小球系膜细胞M M P-2 ，T IM P-2 ，M T 1- MMP和CTGF 的表达及意义 姚芳，李志红，闫喆，刘青娟，段惠军，郄涛 [摘要]　目的　观察高糖刺激的大鼠肾小球系膜细胞基质金属蛋白酶-2 (M M P-2 )及其组织抑制物-2 (TIM P-2 ) 、 膜型基质金属蛋白酶- 1(M T 1-M M P ) 和结缔组织生长因子(CT GF ) 的动态变化以探讨糖尿病肾病(D N ) 的发病机制。 方法　体外培养的大鼠H B ZY - 1 肾小球系膜细胞分为低糖(5 .5m m ol /L 葡萄糖)组、高糖(30m m ol /L 葡萄糖)组和渗透 压对照(5 .5m m ol /L 葡萄糖+24 .5m m ol /L 甘露醇)组，24 、4 8 、7 2 、9 6h 后采用RT-P CR及W est er n b l ott i n g 法分别检测 M M P- 2 、T IM P- 2 、M T 1-M M P及CT GF 的m R NA 及蛋白表达情况，酶联免疫吸附法(E L I SA )检测培养上清中Ⅳ型胶 原的含量。结果　West er n b l otting 结果显示，与低糖组相比，高糖组M M P-2 的表达在24h 时略有升高，较低糖组增 加10 % ±4 % (P 0 .0 5 ) ，至4 8h 时则较低糖组减少4 2 % ±2 % ，其后随时间延长表达持续降低，至9 6h 时较低糖组减少 78% ±2% ；MT 1-MMP表达在24h 开始下降并随时间呈下降趋势，与低糖组相比较，在刺激的24h ，高糖组MT 1-MMP表 达下降了29% ±3% ，随后持续下降，至96h则下降了78% ±9% (P 0.0 1) 。高糖组各时间点TIMP-2 和CTGF表达均较低糖 组增高，其中CTGF 的表达在高糖刺激的24h 即显著增高，为低糖组的20 1% ±24 % ，随后持续增高，至培养96h 为低糖 组的484% ±5 1% (P 0.0 1) ；TIMP-2 的表达在24h 时较低糖组增加55% ±3% ，且随时间延长呈增高趋势(P0.0 1) 。MMP-2 、 TIMP-2 、MT 1-MMP和CTGF 的mRNA 表达与相应蛋白的表达趋势基本一致。与低糖组相比，高糖组细胞上清中的Ⅳ型 胶原于24h 即有增加，且持续增高至96h (P 0.05) 。低糖组和渗透压对照组组内、组间的各指标差异均无统计学意义。 结论　尽管高糖刺激早期可小幅诱导M M P-2 的表达增强，但长期高糖刺激则可抑制M M P-2 和M T 1-M M P 的表达及活 化，同时促进系膜细胞TIMP-2和CTGF 的表达。DN 中肾小球细胞外基质的积聚可能是由于上述细胞因子和蛋白酶引起 细胞外基质代谢失衡所致。 [关键词]　糖尿病肾病；肾小球系膜细胞；基质金属蛋白酶-2 ；基质金属蛋白酶组织抑制物-2 ；结缔组织生长因 子；膜型基质金属蛋白酶- 1 [中图分类号]　R587. 1　　　[文献标志码]　A　　　[文章编号]　0577-7402 (20 13) 10-08 11-07 [DOI]　10. 11855/j.issn.0577-7402.20 13. 10.006 Expression of MMP-2, TIMP-2, CTGF and MT1-MMP in rat glomerular mesangial cells stimulated by high-glucose and its significance 1 2 1 1 1 2 YAO Fang , LI Zhi-hong , YAN Zhe , LIU Qing-juan , DUAN Hui-jun , QIE Tao 1Department of Pathology, Hebei Medical University, Shijiazhuang 050017, China 2Department of Endocrinology, First Central Hospital of Baoding Cit