蜡梅AFLP分子标记技术体系的建立.pdfVIP

武汉植物学研究2007，25(1)：93～97 JournalofWuhanBotanicalResearch 蜡梅 AFLP分子标记技术体系的建立 赵冰，张启翔 (北京林业大学园林学院，北京 100083) 摘 要：利用简易CTAB法、改良的CTAB法和SDS法提取蜡梅[Chimonanthuspraecox(L_)Link]成熟叶和嫩叶的 基因组，并进行了检测比较。结果显示，改 良的CrAB法更适合蜡梅基因组 DNA的提取，蜡梅叶片的年龄并不影响 蜡梅基因组 DNA的提取；同时利用AFLP分子标记技术，采用MseI一 RI酶切组合，从 168对引物中筛选出 10 对带型分布均匀、多态性高且分辨能力强的引物 ，分别为：M23FA6、M24FA6、M25FA6、M23FA7、M24FA7、M41FA7、 M41E94、M64E94、M64E66和M24E75，并确定了适用于蜡梅AFLP反应的最佳酶切连接、预扩和选扩体系，从而为 今后利用 AFLP分子标记技术研究蜡梅的品种分类和野生居群的遗传多样性分析打下坚实的基础。 关键词：蜡梅 [Chimonanthuspraecox(L．)Link]品种；DNA提取；AFLP反应体系 中图分类号： 86；$685．99 文献标识码：A 文章编号：1000—470X(2007)01—0093—05 TheEstablishmentofAFLPM oleculeLabelingTechnique System oftheW intersweetCultivars ZHAOBing，ZHANGQi—Xiang (CollegeofLandscapeArchitecture，扣 ForestryUniversity，Beijing 100083，China) Abstract：ThemethodsofCTAB，improvedCTAB andSDSwereusedofrgenomicDNA ioslation of climaxleavesnadyoungleavesofWintersweeteultivars．Th eresultsindicatedhtathtemehtod sofCTAB wasusefulinW intersweeteultivarsgenomicDNA isolation，nadhteleafagedoesn’taffectgenomicDNA isolationofWintersweeteultivars．Byhteamplifiedfragmentlengthpolymorphisms(AFt )technique， usingMseI-EcoR Ienzyme—cutcombination，tenpairsofprimers(i．e．M23E46，M24E46，M25E46， M23~7，M24E47，M41E47，M41E94，M~E94，M~E66nadM24E75)withhighpolymorphism and powerfuldistinctivenesswereselectedfrom 168pairs ofprimer，andhtebestpre—expna dingna dselective expna dingsystem were determined．Ourresultstentatively establishedhtebasisforhteresearch ofhte euhivarclassificationnadgenticdiversitynaalysis． Keywords：Wintersweetcultivars(Chimonanthuspraecox(L_)Link)；DNAextraction；AFLPreaction system 蜡梅 [Chimonanthuspraecox(L．)Link]指蜡梅 分析却鲜见报道。因此，本研究以河南鄢陵的14个 科蜡梅属的落叶丛生灌木，是我国特