鱼腥藻PCC7120藻红蓝蛋白α亚基体内重组研究.pdfVIP

武汉植物学研究 2006，24(6)：493—497 Journal of Wuhan BotanicalResearch 鱼腥藻 PCC7120藻红蓝蛋 白13[亚基体 内重组研究 滕 吟，周 明 ，陈芳，赵开弘 (华中科技大学环境科学与工程学院，武汉 430074) 摘 要：为了研究藻红蓝蛋白o【亚基的生物合成途径，通过构建相容的4种重组质粒pETDuet-pecA、pCOLADuet- pecE、pCDFDuet-pecF和pACYCDuet-hol-pcyA，将裂合酶基因pecE和pecF、血红素氧化酶基因hol、藻蓝胆素合成酶 基因pcyA和脱辅基藻红蓝蛋白 亚基基因pecA共同转入大肠杆菌 BL21(DE3)，通过色素蛋 白锌电泳和光谱检测 表明产生了生物活性的PecA．PCB。结果表明生成的色素藻胆蛋白具有藻红蓝蛋白 -亚基所特有的光谱性质和可 逆光致变色性质。而在裂合酶基因pecE和pecF不转入大肠杆菌的情况下，大肠杆菌内只有0．1％的PecA-PCB产 生。以上研究对藻胆蛋白生物构建具有重要意义。 关键词 ：藻红蓝蛋白：PecA；pecE；pecF；体内重组 中图分类号 ：Q784 文献标识码：A 文章编号：1000-470x(2006)06．0493-05 BiosynthesisofaFluorescentCyanobacterialPhycoerythrocyanin Holo-仅SubunitinEscherichiacoli TENG Yin，ZHOU Ming’，CHEN Fang，ZHAOKai—Hong (CollegeofEnvironmentalScienceandEngineering，HuazhongUniversityofScienceand Technology，Wuhan 430074，China) Abstract：Theentirepathwayforhtesynhtesisofafluorescentholophycobiliproteinsubunitfrom aphoto- synhteticcyanobacterium (Anabaenasp．PCC7120)wasreconstitutedinEscherichiacoli．Cyanobactefial genesofrenzymesholandpc wereexpressedfrom aplasmidpACYCDuet—ho1-pcyA．Genesforhteapo— protein(PhycoeryhtrocyaninOtsubunit；pecA)wereexpressedonasecondplasmidpETDuet-pecA．Genes ofrhteheterodimeficlyase(pe nadpecF)htatcatalyzeschromophoreattachmentwereexpressedona htirdplasmidpCOLADuet-pecEnadafourthplasmidpCDFDuet-pecF．Uponinduction，recombinantE．coli usedhtecellularpoolofhenietoproduceholo--PecA wiht spectroscopicpropertiesquMiattivelynadquan-． fitafivelysimilartohtoseofhtesameproteinproducedendogenouslyincyanobacteria．However。unlikehte ohterbiliproteins，isolatedPEC showsapronouncedreversiblephotoehemistry。whichhasbeenrelatedto hte —subunit(Ot—PEC)．About0．1％ ofhteapo．PecA wasconvertedtoholo．PecAPCBinasimilraly engineeredE．colistrainhtatlackspecE na dpecF．