慢性难愈创面细菌生物膜体外模型的建立及其分析.pdfVIP

慢性难愈创面细菌生物膜体外模型的建立及分析 摘要 目的：建立慢性难愈创面临床常见细菌的生物膜体外模型，利用激光共聚 焦显微镜观察细菌生物膜形成过程，探索细菌生物膜检测的有效手段。方法： (1)建立细菌生物膜体外模型，摸索生物膜体外模型的建立条件，首先将传统 的平板培养法与引导片培养法进行比较，在此基础上，以引导片法体外培养生 物膜，观察不同时间点和温度对生物膜形成的影响。．(2)激光共聚焦显微镜观 察各菌株生物膜形成过程。采用H№A和碘化丙啶(PD分别标记多糖和细菌 研峨激光扫描共聚焦显微镜观察生物膜形成情况。结果：(1)传统的平板培养 法最终测得的结果稳定性较差，引导片培养法最终所得的结果较稳定，试验重 h 时，各菌株均有散在的绿色荧光，不密集。48h时绿色荧光明显增多，部分与 红色荧光重叠，形成视野中黄色荧光，金黄色葡萄球菌明显。在绿色荧光的强 度和分布上，临床菌株明显多于标准株。培养72h时铜绿假单胞菌和其标准株 的绿色荧光增多。培养5d时绿色荧光较分散。金黄色葡萄球菌在48h形成成熟 的生物膜，铜绿假单胞菌则在72h。结论：(1)慢性创面临床常见的金黄色葡萄 球菌和铜绿假单胞菌均能形成生物膜。(2)采用免疫荧光技术和激光扫描共聚焦 显微镜研究生物膜形成过程是一种简便可行的方法。金黄色葡萄球菌、铜绿假 单胞菌形成生物膜的时间、生物膜的形态与特点都有显著的差异。 关键词：细菌生物膜；激光扫描共聚焦显微镜；免疫荧光技术 THEANALYSIS OFBACTERIALB10FILMFROM CHRONICREFRACTORYWOUNDINVITR0MODEL ABS汀RACT Toestablishchronic woundclinical 0bjective： refractory commonbacteriabiofilminvitromodel laserconfocal byusing bacterialbiofi1mformation forfurther microscopy process， researchon mechanismofmembraneandchronicwound bi0109ical healing． Methods：Thebacterialbiofi1minvitromodelwasestablished to thetraditionalfirstflatculturemethodandthe compare inorderto culture ofculturemethod guide bi0109ical guidance membranemethodin observedifferenttime and vitro， points ofthe membrane ontheinfluence bi0109ical temperature totheobserVe Laserconfocal wasused formation． microscope