蛋氨酸合酶活性筛选体系的建立.pdfVIP

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2016-05-14 发布于安徽
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蛋氨酸合酶活性筛选体系的建立.pdf

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药学学报 Acta Pharmaceutica Sinica 20 12, 47 ( 11): 1463 1469 ·1463 · 氨酸合酶活性筛选体系的建立莹, 李超, 张志丽, 田超, 王孝伟, 刘俊义* (北京大学药学院化学生物学系, 北京大学天然药物及仿生物国家重点实验室, 北京 100083) 5 摘要: 钴胺素依赖的蛋氨酸合酶催化N - 甲基四氢叶酸转移甲基至同型半胱氨酸生成蛋氨酸和四氢叶酸, 直接参与蛋氨酸循环、叶酸循环及含硫氨基酸代谢, 与DNA 、蛋白质合成及生物甲基化有密切关系。本研究采用蛋白层析技术, 将大鼠肝匀浆经超声破碎和高速离心处理后, 依次经过DE-52 批处理、Q Sepharose Fast Flow 离子交换层析和 CHT 陶瓷羟基磷灰石吸附柱层析进行纯化, 并对纯化产物进行了 SDS和 Western blotting 鉴定。采用分光光度法测定蛋氨酸合酶的活性, 对纯化酶的酶促反应动力学进行了研究, 确定了最佳反应条件, 动力学结果显示蛋氨酸合酶的双底物酶促反应的机制为乒乓机制。研究表明, 采用层析技术纯化得到的蛋氨酸合酶适用于以其为靶点的化合物高通量筛选。关键词: 蛋氨酸合酶; 蛋白层析; 分离纯化; 酶促反应动力学; 叶酸拮抗剂中图分类号: R963 文献标识码: A 文章编号: 05 13-4870 (20 12) 11-1463-07 Purification and activity evaluation of methionine synthase * GUO Ying, LI Chao, ZHANG Zhi-li, TIAN Chao, WANG Xiao-wei, LIU Jun-yi (Depa rtment of Chemical Biology, School of Pharmaceutical Science, State Key Laboratory of Natural and Biomimetic Drugs, Peking University, Beij ing 100083, China) Abstract: Methionine synthase (MS, EC3), a key enzyme in the folate metabolism area catalyzing 5 methyl transfer from N -methyltetrahydrofolate to homocysteine to give tetrahydrofolate and methionine, takes a core position in folate cycle, one-carbon-unit transfer