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第九章 分子发光分析法 第七章 分子发光分析法 第七章 分子发光分析法 第七章 分子发光分析法 第七章 分子发光分析法 第一节 分子荧光磷光产生基本原理 第二节 荧光光谱与基本特征 第二节 荧光光谱与基本特征 第二节 荧光光谱与基本特征 第二节 荧光光谱与基本特征 第二节 荧光光谱与基本特征 第二节 荧光光谱与基本特征 第三节 荧光产率与分子结构的关系 第三节 荧光产率与分子结构的关系 第三节 荧光产率与分子结构的关系 第三节 荧光产率与分子结构的关系 第三节 荧光产率与分子结构的关系 第三节 荧光产率与分子结构的关系 第三节 荧光产率与分子结构的关系 第三节 荧光产率与分子结构的关系 第三节 荧光产率与分子结构的关系 第四节 影响荧光强度的环境因素 第四节 影响荧光强度的环境因素 第四节 影响荧光强度的环境因素 第四节 影响荧光强度的环境因素 第四节 影响荧光强度的环境因素 第四节 影响荧光强度的环境因素 第四节 影响荧光强度的环境因素 第五节 分子发光光谱仪结构流程 第五节 分子发光光谱仪结构流程 第五节 分子发光光谱仪结构流程 第五节 分子发光光谱仪结构流程 第五节 分子发光光谱仪结构流程 第五节 分子发光光谱仪结构流程 第五节 分子发光光谱仪结构流程 第六节 定量分析方法 第六节 定量分析方法 第六节 定量分析方法 第六节 定量分析方法 一、溶剂 二、温度 三、溶液的PH值 四、内滤光作用与自吸现象 五、荧光猝灭 一、溶剂 主要表现为溶剂的极性、氢键、配位键的形成对化合物的荧光发生变化。 ?*→?跃迁类型：激发态极性比基态大，溶剂极性增大，跃迁能量降低，发生红移，荧光增强。 氢键、配位键的形成主要影响荧光分子的存在型体、电离状态，荧光强度和形状均发生很大变化。 二、温度 温度升高，外转换的几率增加。荧光强度降低。 三、溶液的PH值 不同PH值下，荧光分子存在形式不同。 四、内滤光作用与自吸现象 自吸现象：化合物的荧光发射光谱的短波长端与其吸收光谱的长波长端重叠，产生自吸收；如蒽化合物。 内滤光作用：溶液中含有能吸收荧光物质发射的荧光的组分，如色胺酸中的重铬酸钾。 五、荧光猝灭 荧光分子与溶剂分子或者其他分子之间存在相互作用，使得荧光强度降低或消失的现象。 （一）、 碰撞猝灭---动态猝灭 M* + Q → M + Q + 热量 激发态分子 猝灭剂 （二）、 生成化合物的猝灭---静态猝灭 M + Q → M Q 基态的荧光物质与猝灭剂反应生成非荧光的化合物，导致荧光的猝灭。 （三）、 氧的猝灭 氧对溶液荧光产生猝灭作用的原因比较复杂，可能包含着多种机理。 （四）、 自猝灭 荧光物质的浓度较大时，会使荧光强度降低。 此外，还有电荷转移猝灭，光化学反应猝灭等。 自猝灭可能有如下几个原因： 1. 荧光物质分子之间的碰撞能量损失; 2. 荧光物质的自吸收; 3. 荧光物质分子的缔合。 Cary Eclipse 荧光分光光度计 荧光、磷光化学/生物发光 美国瓦里安技术中国有限公司 一、荧光分光光度计结构流程 二、磷光分光光度计结构流程 一、荧光分光光度计结构流程 光源 氙灯 激发单色器 样品池 光电倍增管 数据处理 仪器控制 发射单色器 光源 样品池 激发 单色器 检测器 数据处理 仪器控制 发射 单色器 组成：激发光源、样品池、双单色器、检测器。 特殊点：两个单色器，光源与检测器通常成直角。 （一）、激发光源 氙灯、高压汞灯，染料激光器。 （二）、单色器 激发单色器： 选择激发光波长，用以分离出所需用的激发光。 发射单色器： 选择荧光发射波长，用以滤去杂散光、瑞利光、拉曼光和杂质所发射的荧光。 （三）、样品池 I0 It If 样品池四面透光。 （四）、检测器 光电倍增管。 检测器的方向与激发光的方向成直角，以消除样品池中透射光和杂散光的干扰。 二、磷光分光光度计结构流程 光源 样品池 激发 单色器 检测器 数据处理 仪器控制 发射 单色器 斩波器（磷光镜） 利用荧光和磷光发射寿命的差别 通常情况下，样品池需要放在盛液氮的石英杜瓦瓶内，来测定低温磷光。 二、定量方法 一、定量依据 一、定量依据 荧光强度 If 正比于吸收的光强度 Ia 和荧光量子产率Φ ： 由朗伯-比耳定律得： 荧光强度 If ： 生物与化学工程学院 仪器分析 基态分子吸收能量(电能、热能、化学能或光能等)，电子由基态跃迁到激发态，当电子由激发态返回基态时，以发射电磁辐射(即光)的形式释放能量。 分